低温生物医学技术-第二讲PPT.pptVIP

怎么评估细胞体积随渗透压的变化 0 1 进行无量纲化处理 1-骨髓细胞；2-酵母细胞；3-仓鼠细胞；4-红细胞 （Mazur,1970） 2.6 细胞低温损伤的机理分析 此图的重要意义在于告诉人们，对于某一种细胞和某一确定的保存方案，确实存在着某种最佳冷却速率，对应最大的存活率，而过快或过慢的冷却速率都会导致细胞的损伤，降低存活率。 细胞低温损伤的两因素假说 存活率 冷却速率 (Mazur,1972) 胞内冰损伤 溶液损伤 总效果 胞外出现冰（胞外冰）； 胞外溶液浓度增加； 胞内水分及时向外渗透; 细胞激烈收缩； 胞内不出现冰（无胞内冰）。 冻结以前: 慢速冷却过程: （细胞小、膜渗透率高、降温慢） 水（多） 胞外溶液 胞内溶液 等渗 不等渗 胞外出现冰（胞外冰）； 胞外溶液浓度增加； 胞内水分来不及向外渗透; 胞内溶液过冷; 胞内出现冰（胞内冰）。 冻结以前: 快速冷却过程: （细胞大、膜渗透率低、降温快） 水(少) 胞外溶液 胞内溶液 等渗 不等渗 低温生物医学技术第二讲 低温生物医学基本原理之一-----溶液的冻结特性与细胞损伤 　　　迄今为止，人们采用的低温保存方法，都是将细胞、组织置于含有抗冻剂的水溶液中进行降温、复温的，而在细胞内部也是富含多组分的水溶液。 因此，研究多元溶液的冻结、融化特性，以及他们可能对细胞产生的损伤是低温生物医学的重要任务之一。 2.1 水-冰相图 三相点,温度为273.16K,压力为610.62Pa(冰点?) 1atm,冻结点是273.15K(冰点?)，这一段是冰水平衡线(给我们什么启示?降低冰点？) 2.2 　纯水的冻结特性 t T ０℃ a b c d e 样品温度 降温槽温度 降温曲线 a-b段：水以释放显热的方式降温； b-c段：当过冷到b点时，冰晶形成，释放的潜热使样品的温度迅速回升到0℃； c-d段：水在平衡条件下，继续析出冰晶，不断释放大量固化潜热。 d-e段：全部水被冻结后，固化的样品以较快速率降温。 特别指出：d-e段的降温速率可能远大于槽温的下降速度，因此在生物细胞的低温保存中，如何控制溶液固化后的冷却速率是热控制的一个重要问题和难点。 讨论：怎么来控制？ 2.3 过冷(supercooling)vs 成核(nucleation) 冰晶的成核过程主要由热力学条件决定，而冰晶生长过程主要由动力学条件决定。 等温等压条件下固液两相体系的平衡条件是： 液相吉布斯函数 固相吉布斯函数 冰点 欲产生结晶的自发过程（即b到c），必须使液体过冷到某一低于Tf的温度Tc。 则有: 过冷度 形成冰晶的相变驱动力 过冷度越大，驱动力也越大！ 怎么实现较大过冷度？ 成核理论 当水处于过冷态(亚稳态)时,可能以两种形式成核,即均匀成核(homogenous nucleation)和非均匀成核(heterogenous nucleation). 均匀成核,是指在一个体系内各处的成核几率相等,由于热起伏(或热涨落)可能使原子或分子一时聚集成为新相的集团(又称胚芽,embryos),若胚芽大于临界尺寸r*,则成为晶核。若液相分子热起伏聚集的冰相集团尺寸大于r*，则结冰过程为自发过程。 胚芽区 晶核区 r* O 固相的形成能 固相尺寸r 过冷度（℃） -30 -20 -10 0 0 40 80 120 晶核的临界尺寸r*（A） 当水的过冷度增加时，偏离平衡态的程度增加，冰晶核的临界尺寸和形成能就剧烈降低，这样就极大地提高了形成冰晶核的几率。怎样才能形成较大过冷度？ 非均匀成核，又称异相成核，是指水在尘埃、容器表面及其它异相表面等处形成晶核。一般所要求的过冷度比均匀成核要小得多。 在实际样品冻结过程中，过冷点（通常与冻结点混淆）具有一定的随机性！ 那我们要怎么解决这个问题？ 2.4 冰晶形成生长过程及其对细胞的影响 （一）降温速率的影响 慢速降温 形成晶核少，冰晶生长速率快，最终形成数目较少但体积较大的冰晶。 快速降温 形成晶核多，冰晶生长受限制，最终形成数目多而体积小的冰晶。 （二）“置核（seeding）”的必要性 在实际降温过程中，水或溶液中可能出现较大过冷度；潜热释放完全后，可能出现很高的降温速率。这两种情况对细胞来讲都是不利的。 因此，将事先浸入液氮中的细丝取出，并轻轻接触溶液表面，在极小的局部区域形成较大的过冷度，形成晶核。 这有点像人工降雨中使用的降雨弹功能！！ （三）无论何种结晶，冰晶的存在都会对细胞产生致命的损伤！！ cooling