实验七 食品中金黄色葡萄球菌的检验.doc

实验七 食品中金黄色葡萄球菌检验 葡萄球菌在自然界分布极广，空气、土壤、水、饲料、食品(剩饭、糕点、牛奶、肉品等)以及人和动物的体表粘膜等处均有存在，大部分是不致病，也有一些致病的球菌。金黄色葡萄球菌是葡萄球菌属一个种。可引起皮肤组织炎症，还能产生肠毒素。如果在食品中大量生长繁殖，产生毒素，人误食了含有毒素的食品，就会发生食物中毒，故食品中存在金黄色葡萄球菌对人的健康是一种潜在危险，检查食品中金黄色葡萄球菌及数量具有实际意义。金黄色葡萄球菌能产生凝固酶，使血浆凝固，多数致病菌株能产生溶血毒素，使血琼脂平板菌落周围出现溶血环，在试管中出现溶血反应。这些是鉴定致病性金黄色葡萄球菌的重要指标。50ml三角瓶（全班共用） 0.85%生理盐水 70ml/瓶 1瓶 250ml三角瓶（全班共用） 0.85%生理盐 225ml/瓶 1瓶 500ml三角瓶 7.5%NaCl肉汤 50ml/瓶 1瓶 250ml三角瓶 普通营养琼脂 100ml/瓶 1瓶 250ml三角瓶 B—P培养基 95ml/瓶 1瓶 250ml三角瓶 兔血液 5ml 四、实验内容 （一）、增菌培养法 样品处理→→选择性增菌→→选择性平板分离→→血浆凝固酶试验鉴别→→结果报告 第一天 样品处理和增菌培养 （一）、样品处理 固体或半固体食品：以无菌操作称取25g样品放入装有225mL灭菌生理盐水的灭菌均 质杯内于8000r/min均质1～2min制成1:10样品匀液。 　　液体食品:用灭菌吸管吸取25mL样品放入装有225mL灭菌生理盐水的灭菌玻璃瓶内 (瓶内预置适当数量的玻璃珠)经充分振摇制成1:10样品匀液。增菌mL稀释液接入7.5%NaCl肉汤或胰蛋白胨肉汤中。37°C培养24小时。 培养：放于36±1℃培养24h。 培养结果：在NaCl肉汤中呈混浊生长，胰蛋白胨肉汤中有时液体澄清，菌量多时呈混浊生长。 第二天 接种选择性平板进行分离培养 （一）、接种选择性平板 取增菌液1环，划线接种于血平板或B－P平板。 （二）、培养 放于36±1℃培养24h。 第三天 观察分离结果、镜检、做血浆凝固酶试验 （一）、观察分离结果 结果：金黄色葡萄球菌，在血平板上呈：金黄或白色菌落，大而凸起，表面光滑，周围有溶血圈；在Baird-Parker平板上：菌落为圆形，直径2-3mm，颜色灰或黑色，周围有一浑浊带，在其外层有一透明圈。 （二）、革兰氏染色、镜检 操作：革兰氏染色→镜检 结果：金黄色葡萄球菌，革兰氏阳性，显微镜下呈葡萄状排列无芽胞，直径0.5-1μm。 （三）、结果报告： 综合形态特征，血平板情况以及血浆凝固酶试验结果，判别检样有否金黄色葡萄球菌作出报告。 五、思考题 金黄色葡萄球菌在血平板或B－P平板上的菌落特征如何？为什么？ 食品中能否允许有个别金黄色葡萄球菌存在？为什么？ 鉴定致病性金黄色葡萄球菌的重要指标是什么？