微生物学课程第一章绪论与基本实验技术.ppt

扫描电子显微镜 显微观察样品的制备 光学显微镜样品的制备 活体观察。 压滴法，悬滴法，菌丝埋片法。 染色观察。 悬滴法 2,电子显微镜样品制备 生物样品电镜观察前，必须进行固定和干燥，否则镜筒中的高真空会导致其严重脱水，结构变形。此外，由于构成生物样品的元素对电子的散射和吸收能力较弱，样品一般需用重金属盐染色和喷镀，以提高其反差。 显微镜下的生物 代表性细菌 单球菌： 细胞分裂沿一个平面进行，新个体分散而单独存在. 如尿素微球菌(Micrococcus ureae) 第一章：微生物的分离和纯培养 微生物培养的常用器具 Test tube (试管) Culture dish/Petri dish(培养皿） Shake Flask （三角瓶) Fermentor Lab scale fermentor Fermentor Industrial Scale fermentor 接种操作 无菌箱或无 菌室内操作 用固体培养基获得纯培养 常见固体培养基 涂布平板法 稀释倒板法 平板划线法 用液体培养基获得纯培养 对于不能在固体培养基上生长的微生物，有一部分可以用液体培养基稀释法获得纯培养。 单细胞（孢子）分离 稀释法有个重要的缺点，它只能分离样品中占优势的菌种。 采用显微分离法从混杂群体中直接分离单个细胞进行培养，这种获得纯培养的方法称为单细胞分离法。 选择培养 1，采用选择性平板。 2，富集培养。 菌种的保藏 1、菌种保藏的原理 首先要挑选典型菌种的优良纯种,最好采用它们的休 眠体(如分生孢子、芽孢等);其次,创造一个最有利休眠的环境条件,如干燥、低温、缺氧、避光、缺乏营养以及添加保护剂等。 2、菌种保藏方法 1）斜面菌种低温保藏法---利用低温对微生物生命活动有抑制作用的原理进行保藏。把斜面菌种、固体穿刺培养物或菌悬液等,直接放入4～5℃冰箱中。保藏时间一般不超过3个月,到时必须进行移接传代,再放回冰箱。 2）砂土管保藏法---将干燥砂粒与细土混合后灭菌制成砂土管,然后接种保藏 。若把砂土管放在低温或抽气后密封,效果更佳。此法适用于产孢子及芽孢菌种的保藏。保藏期1～10年 3）石蜡油封藏法---向培养好的菌种斜面上,加入灭菌石蜡油,高出斜面1cm,然后蜡封管口,放入冰箱。该法既可防止培养基水分蒸发,又能使菌种与空气隔绝。保藏期1～2年 4）真空冷冻干燥法---是目前较理想的一种方法。在低于-15℃下,快速将细胞冻结, 并保持细胞完整,然后在真空中使水分升华致干。在此环境中,微生物的生长和代谢都暂时停止,不易发生变异,故可长时间保存,一般为5～10年,最多可达15年之久。此法兼备了低温、干燥及缺氧几方面条件,使微生物可以保存较长时间,但手续较麻烦,需要一定的设备。 3、菌种保藏中心 我国由于1979年7月成立了中国微生物菌种保藏管理委员会(CCCCM), ----普通微生物菌种保藏管理中心(CCGMC)--中科院微生物所,北京(AS),真菌、细菌;中科院武汉病毒研究所,武汉(AS-IV),病毒。 ----农业微生物菌种保藏管理中心(ACCC)---中国农业科学院土壤肥料研究所,北京(ISF)。 ----工业微生物菌种保藏管理中心(CICC)---轻工业部 美国的“美国典型菌种收藏所”(ATCC)，保藏方式主要采用冷冻干燥和液氮超低温冻结法。 显微镜和显微技术 决定显微观察效果的因素：放大倍数，分辨率和反差。 分辨率是辨别两点间最小距离的能力。 反差是样品区别于背景的程度。 普通光学显微镜 由于肉眼的正常分辨率为0.25mm左右，因此光学显微镜的有效放大倍数只能达到1000-1500倍。 暗视野显微镜 相差显微镜 光穿过标本时，由于标本各部分的折射率和厚度不同，加快和滞后的光波产生相位差。利用特殊光学装置——环状光阑和相差板，可以将产生的相位差转换为人眼可以观察的振幅差。 荧光显微镜 透射电子显微镜 微生物学课程 ——绪论与常规实验技术 一、什么是微生物 定义：微生物是所有形体微小、单细胞或结构较为简单的多细胞生物、甚至没有细胞结构的生物的通称。 种类：微生物类群十分庞杂，包括： 无细胞结构的病毒、类病毒、拟病毒等， 属于原核生物的细菌、放线菌、立克次氏体、衣原体等， 属于真核生物的酵母菌和霉菌，单细胞藻类、原生动物等。 二，微生物和人类的关系 有益的方面。 1，在食品生产中应用广泛。 如：面包，奶酪，酸奶，各种酒类，柠檬酸等食品添加剂，各种氨基酸，各种维生素，酱醋腐乳泡菜等副食品…… 2，在医药方面应用广泛。 如：青霉素等抗生素