《培养基配制与灭菌》PPT课件.ppt

* 培养基灭菌后于室温下培养1－2d，确定无菌生长，方可使用。 9.无菌检查 * 注意事项 1.药品称量要符合称量规则 2.调pH值，应小心操作，避免过头，以免回调而影响培养基内各离子的浓度 3加热过程中要不断搅拌，控制火力，防止培养基因暴沸而溢出或琼脂沉淀在瓶底烧焦。 4.培养基配制完成后应立即灭菌或暂时冷藏，防止微生物生长而改变培养基的营养比例和酸碱度所带来的不利影响 5.分装过程，应注意不使培养基玷污管口或瓶口，以免污染棉塞，造成杂菌生长。 6.灭菌标签用铅笔书写，以防高温灭菌时蒸汽模糊字迹。 7.使用高压灭菌器时，要注意用前的加水。 * 培养基的组成和配比合适与否，对微生物的生长发育、产品的产量、提炼工艺的选择和成品质量都会产生相当大的影响。 * 由于这种培养基中含有一般细胞生长繁殖所需要的最基本的营养物质,所以可供微生物生长繁殖之用。 * 如果加入适量的抗菌药物（如各种抗生素、酚等），则可用来分离各种放线菌。 * 干热灭菌是利用高温使微生物细胞内的蛋白质凝固变性而达到灭菌的目的。 细胞内的蛋白质凝固性与其本身的含水量有关，在菌体受热时，当环境和细胞内含水量越大，则蛋白质凝固就越快， 反之含水量越小，凝固缓慢。 干热法：火焰灼烧灭菌和热空气灭菌。 1、火焰灼烧适用于接种环、接种针和金属用具如镊子等，试管口和瓶口，涂布用玻璃棒。 2、热空气灭菌利用高温干燥空气（160－170C）加热灭菌1－2h，适用于玻璃器皿和培养皿等。原理加热使蛋白质变性，与水的含量有关，当环境和细胞含水量越大，凝固越快。 3、注意事项： 1）培养基、橡胶制品、塑料制品不能用此法； 2）温度控制在180°； 3）物品不能太挤； 4）温度降至70°时才开箱门。 高压蒸汽灭菌 高压蒸汽灭菌是将待灭菌的物品放在一个密闭的加压灭菌锅内，通过加热，使灭菌锅隔套间的水沸腾而产生蒸气。从而使温度高于100℃。导致菌体蛋白质凝固变性而达到灭菌的目的。 常规高压蒸气灭菌： 1.0kg/cm2,121. ℃, 20-30分钟； 0.56kg/cm2,112.6℃,20-30分钟. * 另外由于辐射使空气中的氧气电离成氧离子，氧离子再使氧气氧化生成臭氧或使水氧化生过氧化氢，过氧化氢和臭氧有杀菌作用。紫外灯照射距离以不超过1.2米为宜。 一般应用于无菌室和接种箱的灭菌。 * 无菌滤膜（孔径0.2微米）过滤可以有效除去细菌，但不能除去病毒，因此过滤后的溶液不一定是没有病毒的。 * 制棉塞的方法多种，形状各异，总原则如下：用脱脂棉制作（脱脂棉花易吸水） （2）松紧适合， （3）塞头不要太大，一般为球状。 （必须用铅笔写），注明组别、姓名、何种培养基。 * 玻璃器皿常用干热灭菌。干热灭菌为160-170℃，1-2小时。 1、设备：高压灭菌锅 2、时间长短根据灭菌物品的种类和数量不同有所变化。 3、适用于培养基、工作服、橡胶物品等的灭菌，也可用于玻璃器皿的灭菌。 4、注意事项： 1）冷空气彻底排除；2）加水；3）压力降为“0”时方可打开。 一般培养基，121℃, 15-30min；含糖培养基，112℃, 15-30min；易产生沉淀的物质：分别灭菌后再混合 * 培养基配制与灭菌 实验中心网站：/*** * 氧化还原和电极电势 自定义内容 * 氧化还原和电极电势 自定义内容 氧化还原和电极电势 自定义内容 * 培养基配制与灭菌 2010.10 ~ 2010.12 * 微生物实验课是微生物学课程学习中的一个重要环节，它不仅与课堂讲授的基本理论、基础知识相结合，而且也是学习后续课程和进行科研工作的基础，同时又是培养学生独立思考和理论联系实际能力的重要手段。 * 发酵工程 基因工程 细胞工程 酶工程 微生物学 实验技术 * 常用培养基的制备和灭菌 土壤中微生物的分离纯化 细菌的形态观察 细菌细胞的生理生化反应 霉菌、放线菌的形态观察 酵母菌的形态观察及微生物直接计数法 葡萄酒的酿制 实验一 常用培养基的制备与灭菌 * 实验目的 1.了解培养基的配制原理,掌握配制培养基的一般方法和步骤 2.了解常用灭菌方法的原理及使用范围，重点掌握高压蒸汽灭菌法的操作步骤和注意事项 3.熟悉分离、培养微生物前的有关准备工作及操作方法。 * 实验原理 一、培养基（medium) 1.定义：由人工配制的适合微生物生长、繁殖或适合积累代谢产物的营养基质。 2.六大要素：水、碳源、氮源、无机盐、生长因子、微量元素 * 3.分类 按培养基的物理状态 固体培养基：固体状，通常在液体培养基中加入1.5-2%琼脂配制而成，用于分离、鉴定、计数、保藏等 液体培养基：液体状，未加任何凝固剂，工业大规模发酵生产及