微生物学 实验 普通光学显微镜的使用及细菌形态的观察.ppt

实验一 普通光学显微镜的使用及细菌形态的观察 主 讲:文晴 生命科学学院 * 实验课要求 作图要求：实验报告要求用蓝色或黑色钢 笔、圆珠笔或签字笔撰写，要 求用铅笔作图（包括视野、观 察结果、放大倍数等； 值日要求：每四人一组，包括物品归位、 黑板、地面、台面等，值日结 束后经老师同意方可离开。 一、实验目的 了解显微镜的构造和各部分的作用，掌握显微镜的使用方法 学习并掌握油镜的原理和使用方法 了解并观察细菌的三种基本形态 目镜 镜筒 转换器 物镜 通光孔 聚光器 压片夹 反光镜 镜座 粗准焦螺旋 细准焦螺旋 镜臂 镜柱 载物台 机械部分和光学部分 普通光学显微镜的构造可分为两部分： 一、普通光学显微镜的基本结构 二、实验原理：显微镜的工作原理 ◆　物镜上的标识 显微镜的总放大倍数=物镜放大倍数X目镜放大倍数 油镜的放大倍数可达100× ，放大倍数这样大的镜头，焦距很短，直径很小，但所需要的光照强度却最大。 由低倍镜转为高倍镜时，通过增加照明强度和开大虹彩光圈，以增大高倍镜及油镜下视野的亮度。 从标本玻片透过来的光线，因介质密度不同（从玻片进入空气，再进入镜头），有些光线会因折射或全反射，不能进入镜头，致使在使用油镜时会因射入的光线较少，物像显现不清。 为了不使通过的光线有所损失，在使用油镜时需在油镜和玻片之间加入与玻璃的折射率相仿的镜油（通常使用香柏油，其折射率n =1.52）。增加了视野的进光量，从而使物象更加清晰。 显微镜的分辨率或分辨力（resolution or resolving power）是指显微镜能辨别两点之间最小距离的能力。从物理学角度看，光学显微镜的分辨率受光的干涉现象及所用物镜性能的限制，可表示为： 式中： D =显微镜分辨两点间的最短距离 λ=光波波长（平均0.55?m) NA=物镜的数值孔径值。 ◆　显微镜的性能 数值孔径则取决于物镜的镜口 角和玻片与镜头间介质的折射率， 可表示为：NA=n· sin(α/2） n: 物镜和被检标本间介质的折射率 ?：镜口角。 物质 折射率 物质 折射率 空气 1 亚麻油 1.47 水 1.33 石蜡油 1.487 甘油 1.487 香柏油 1.515 玻璃 1.52 丁香油 1.535 冬青油 1.536 浓松节油 1.542 以香柏油为介质的油镜所能达到的数值孔径（NA一般在1.2～1.4）要高于低倍镜、高倍镜等物镜（NA都低于1.0）。数值孔径通常在0.65左右的高倍镜只能分辨距离不小于0.4μm的物体，而油镜的分辨率却可达到0.2μm左右。 三、实验器材 1、标本片：四联球菌、枯草芽孢杆菌 2、试剂：香柏油、二甲苯 3、仪器及其它用具：显微镜、擦镜纸等 四、实验步骤 1、显微观察步骤 1）低倍镜观察（10×）： 2）高倍镜观察（40×）： 3）油镜观察（100×）： 2、显微镜用毕后的处理 低倍镜的操作 右手握住镜臂，左手拖住镜座，将显微镜放在自己身体的前方，离实验台边缘10 cm左右处； 接通电源，打开显微镜电源开关； 3. 旋动转换器，将低倍镜移到镜筒正下方； 4. 调节光源强度，同时用眼对准目镜，仔细观察，视野亮度均匀； 5. 将标本放在载物台上，旋转推动器，使观察的目的物置于圆孔的正中央； 6. 转动粗准焦螺旋，上升载物台至距离物镜约0.5 cm（注意：眼睛注视物镜，以防物镜和载玻片相碰）； 7. 左眼观察目镜，调节粗、细准焦螺旋直至目的物清晰为止。 高倍镜的操作 转换物镜。旋动转换器将低倍镜换成高倍镜（注意：在转换物镜时要从侧面观察，以防镜头与标本片相撞，如果高倍镜触及标本片，应立即停止旋转，并重新用低倍镜调焦）； 调焦。调节光圈，使光线亮度合适，再调节细准焦螺旋直至目的物清晰； 观察。移动推动器，找到合适的目的物，并移至视野的中心进行观察。 （如果用高倍镜未能看清目的物，则可换用油镜观察） 油镜的操作 1.转换油镜。调节粗准焦螺旋，下降载物台约2 cm，转换油镜镜头； 2.加香柏油。在标本片的镜检部位滴一滴香柏油；从侧面注视，用粗准焦螺旋缓慢上升载物台，使油镜头浸没在油中，刚好贴近载玻片； 3. 调焦。上升聚光器，将虹彩光圈开大，使光线充分照明；缓慢调节细准焦螺旋，直至物像清晰。 4. 观察。 多观察几个视野，选取菌体分布均匀的视野进行菌体