利用啤酒酵母提取RNA的氨法工艺研毕业论文.docVIP

目 录 0.题目…………………………………………………………………………………2 一.前言………………………………………………………………………………2 二.正文………………………………………………………………………………2 1.材料…………………………………………………………………………………2 2.方法…………………………………………………………………………………3 2.1啤酒酵母RNA含量的测定………………………………………………………2.2氨法破壁工艺……………………………………………………………………2.3沉淀提取RNA……………………………………………………………………2.4核酸纯度测定………………………………………………………………………………………………………………………………………………………4 3.1啤酒酵母泥的核酸含量测定……………………………………………………3.2不同酵母浓度对RNA提取率的影响……………………………………………不同氨浓度对酵母RNA提取率的影响…………………………………………3.4　分步沉淀法去除蛋白质试验……………………………………………………………………………………………………………………………………6 三.致谢………………………………………………………………………………7 四.参考文献…………………………………………………………………………8 利用啤酒酵母提取RNA的氨法工艺研究 摘　要采用氨法破壁提取RNA，当酵母质量分数为10%，氨为1.0%时，采用分步沉淀法，调蛋白质的等电点后，再加入复合蛋白质沉淀剂去除蛋白质，可获得纯度在83%的优质酵母RNA，核酸的提取率是干酵母的2%以上。关键词啤酒酵母；RNA；氨法工艺 Study on Beer Yeast RNA Extraction with Ammonia Method AbstractThe cell wall of beer yeast was broken with ammonia method. The best yeast and ammonia concentration for breaking cell was 10% and 1.0% respectively. The protein was removed by regulating the isoelectric point and chemical agents . Then the high quality yeast RNA with the purity of 83% was obtained. Key Words:Beer yeast, RNA, Ammonia, Process 　　酵母含有的较高的核酸（RNA），在医药、食品、化妆品以及农业等行业都有重要的用途。随着我国啤酒业的日益发展，啤酒厂淘汰的废弃啤酒酵母泥不断增多。综合利用大量的废弃啤酒酵母泥提取核酸，不仅可以增加经济效益，还能解决饲料酵母存在高核的问题。RNA的提取方法多有报导［1～3］，但国内用氨法破壁提取核酸的方法较为罕见。目前工业上常用的方法是：食盐法、混合盐法以及氢氧化钠破壁法［4］。由于被淘汰的啤酒酵母菌龄较老，蛋白含量较高而核酸含量较低，因此采用工业上常用的一次沉淀提取工艺［4］，难以获得高纯度的优质核酸（RNA企业质量：经定磷法测定RNA含量≥80%，水分≤8%为优质品，RNA含量≥70%，水分≤8%为一级品）［1］。我们就淘汰的啤酒酵母进行氨法提取工艺研究，旨在为大工业化生产提取核酸，提供切实可行的工艺。 1　材　料 啤酒酵母泥：， 25～30℃的恒温恒湿箱培养，然后经离心，酵母含水量为75%～78%左右。　　标准啤酒酵母RNA：生化试剂，上海生化试剂厂。　　氨水：化学纯（含量25%～28%，），福建三明化工厂产品。　　三氯乙酸：化学纯，北京化工厂。　　三氯化铁：化学纯，北京化工厂。 2　方　法 2．1　啤酒酵母RNA含量的测定　　高氯酸法：称取一定量的酵母泥，用5%高氯酸在100℃条件下水解破壁15 min，3600 r/min离心15 min，取其上清液，用752-G紫外分光光度计测定，波长260nm、280nm，石英比色皿，光程1cm。　　研磨破碎法：称取一定量的酵母泥，加入适量石英砂置于研钵中，研磨数十分钟，3600 r/min离心15 min，取其上清液，用752-G紫外分光光度计测定，波长260nm、280nm，石英比色皿，光程1cm。2．2　氨法破壁工艺　　称取一定量的酵母泥，加入适量的氨水和水，置60℃温度的水浴条件下，破壁25min，离心（3600 r/min）10 min，其上清液即为核酸抽提液。2．3　沉淀提取RNA　　将核酸抽