正交设计法优台湾金线莲组培培养基毕业论文.doc

正交设计法优选台湾金线莲组培培养基 海洋与生化工程学院 生物工程专业 [摘 要]本实验以台湾金线莲植株茎段作为外植体，应用L9（3４）正交设计实验研究不同的因子对金线莲茎段继代增殖的影响， 应用L16（45）正交设计实验研究不同的因子对金线莲组培苗生根效果的影响，优化筛选出适宜于金线莲茎段增殖及生根的组培培养基。试验结果表明：对于台湾金线莲来说，适宜于金线莲茎段增殖的组培培养基为：MS＋3.0mg/Ｌ6-BA＋0.25mg/ＬNAA＋20g /L蔗糖＋40g/L香蕉泥；适宜于金线莲组培苗生根培养的组培培养基为：1/2MS＋0.5mg/LIBA＋0.5mg/LNAA＋1g/L活性炭+10g/L香蕉泥。 [关键词]台湾金线莲；增殖培养；生根培养；正交设计 金线莲（学名：Anoectochilus roxburghii (Wall.) Lindl.）又称金线兰、金不换、金钱草等，为兰科开唇兰属，斑叶兰亚族，陆生兰，多年生草本植物[1-2]。在中国、日本、老挝等国均有金线莲，生长于海拔400-1200m处的阴湿地带，花期9-10月，果期10-11月，它性喜阴凉并且空气潮湿地，尤其是喜欢生长在有常绿阔叶树的沟边、石壁上或是在土质较为松散的潮湿地带, 要求温度20-25℃，且光照约为正常日照的1/3, 最忌阳光直射[3-4] 金线莲为名贵中草药，在民间被称为“药王”，享有“神药”、“乌人参”等美称[6]。金线莲全草都可入药，有淡淡的香气，性平、味甘，具有清热凉血、解毒消肿、润肺止咳、祛风利湿、强心利尿、生津养颜、调和气血、延年益寿等功效，经常服用能有效调节身体气血，提高免疫功能，在民间治疗范围较广。由于金线莲对生长环境极为敏感，在自然条件下，金线莲不易萌发，繁殖能力低，加上长期的人为采挖，导致野生金线莲日益减少，濒临灭绝[5]。由于野生种质资源稀缺，福建省把金线莲列入省级药材保护品种的名录中，且已被列入台湾需要保护的稀有植物之列。利用植物组织培养这一生物技术，对金线莲种质资源进行保存与开发利用，该技术的应用对药用濒危植物具有重要的研究意义与经济价值。金线莲除药用外，还是一种具观赏性价值的室内植物[6]。 金线莲大多是以分根法或扦插法繁殖，繁殖系数较低，很难形成大规模的种植。利用组织培养技术快速繁殖，组培苗人工种植实现培植周期短、药材质量优良和稳定可控的栽培管理研究等实现规模化生产金线莲成为目前通用的技术。目前研究的大多是以茎段、茎尖或叶片为试验材料进行金线莲的基础研究。通过芽茎段或芽诱导方式培养,可以达到快速繁殖组培苗的目的,1株野生（或栽培）苗通常可切成5-8个芽茎段，经过一个月适宜的培养基上培养，每个茎段都能长出1个侧芽，每个侧芽具有2-3个节，部分还会出现二级侧芽，这些侧芽又可以进行芽茎段分离培养。培养周期1.5个月时，繁殖系数可达6-9倍。冯亦平等[7]对金线莲无菌苗的叶片、茎段和茎片等三种外植体进行诱导研究，发现茎片是快繁的最佳外植体，诱导产生愈伤组织，而进行不定芽的分化；王雅英等[8]采用茎段、叶片、茎片或不定芽为材料，进行组织诱导，发现不定芽为诱导愈伤组织的最佳外植体；在植物组织培养中都是由外植体产生不定芽，一般要经脱分化的过程，形成愈伤组织的细胞。然后再分化，由这些分生组织形成器官，大多数情况下都是先形成芽，然后在形成根。虽然认为金线莲的最佳外植体为茎段，但是在金线莲组织培养时，培养基、激素(种类或浓度)、营养物等的选择，对金线莲丛生芽的增殖分化及生根都是有很大的影响。 大多数兰科植物组织培养都要经过原球茎－丛生芽－生根壮苗3个阶段，在台湾金线莲的组织培养过程中，基本未见过原球茎阶段。台湾金线莲组织培养过程是不经过原球茎阶段，直接诱导产生丛生芽，这样可加快其培养的速度，更有利于优良种源的繁殖[9-11]。因此，丛生芽以及生根的诱导是金线莲快速繁殖的重点。本实验以台湾金线莲无菌组培苗为材料，应用正交试验的方法对台湾金线莲增殖培养基与生根培养基进行设计，以期优化筛选出具有最佳组合效果的台湾金线莲培养基，为保护当地野生种质资源，并为其大规模培养、产业化生产提供有利的技术支持。 1．实验器材及药品 1.1器材 电子天平、电磁炉、高压灭菌锅、烧杯、容量瓶、玻璃棒、培养瓶、移液管、胶头滴管、剪刀、刀、镊子、紫外灯、酒精灯、超净工作台。 1.2药品 75%酒精、90%酒精（95%酒精）、0.1%HgCl、0.1mg/L NaOH、0.1mg/L HCL、无菌水、大量元素、微量元素、铁盐、有机盐、琼脂粉（卡拉胶）、蔗糖、NAA（α-萘乙酸）、6-BA(6-苄氨基嘌呤)、IBA（吲哚乙酸）、活性炭（AC）、香蕉泥。 2.实验方法 2.1 取材 材料取自杭州木木生物科技有限公司长势良好、根茎粗壮的台湾金线莲组培苗。 2.2 培