烟草T-DNA插入突变体的旁侧序列扩毕业论文.doc

青 岛 农 业 大 学 本科生毕业论文 论 文 题 目：烟草T-DNA插入突变体的旁侧序列扩增 专 业 班 级 烟草09级01班 姓名（学号） 指导老师姓名 指导老师职称 硕士研究生 完 成 时 间 2013年5月28日 摘要： 1 关键词： 1 Abstract： 2 Key words: 2 引言： 3 关键词： 3 1.材料和方法 4 1.1试验地点及时间 4 1.2实验材料 4 1.3实验方法 4 1.4 DNA 纯度、浓度覆分子量 的测定 5 1.5结果和讨论 5 2.TAIL-PCR 5 2．1反向PCR 6 2.2PCR步移 7 2.3TAIL-PCR实验 8 2.4制胶、跑电 9 2.5切胶回收、纯化DNA 10 2.5. 11 2.5. 12 3.小结与结论 12 致谢 12 参考文献 12 烟草T-DNA插入突变体的旁侧序列扩增 摘要：通过TALL-PCR技术来分离与已知序列邻近 的未知 DNA 序列，利用 3 个根据已知序列设计的嵌套特异性引物分别和简并引 物组合进行 PCR 反应，选择恰当退火温度对目标片段进行 PCR 扩增。通过在测序凝胶上电泳条带的比较筛选出不同的表达的基因，并回收这些ＤＮＡ片段，经扩增后作为探针，在c ＤＮＡ或基因组ＤＮＡ库中扫描找到相关基因。应用TALL-PCR技术研究烟草基因功能，能够更好的推动烟草功能基因组学研究。TAIL-PCR 技术作为一种使用技术简 单易行，反应高效灵敏，产物特异性高，重复性好，能够在较短的时间内获得目标片段，已经在分子生物学研 究领域广泛应用。本文从 TAIL-PCR 技术原理出发，对该技术特异性引物设计、随机引物组合选择、PCR 反 应条件等关键性问题进行综述。TAIL-PCR 是一种较为成熟的扩增 T-DNA 插入旁邻序列的技术，它操作相对简单，具有高效性，特异性高，应用非常广泛。 关键词： TALL-PCR技术 突变体 旁侧序列扩增 Flanking sequence of tobacco T-DNA insertion mutants of amplification Abstract: through the TALL-PCR technology to separate the unknown DNA sequence adjacent with the known sequence, using 3 nested specific primers according to the known sequence design respectively and degeneracy primer combinations of PCR reaction, selection of appropriate target fragment was amplified by PCR annealing temperature. By sequencing gel electrophoresis bands screened out the different expression genes, and the recovery of these DNA fragments, amplified and used as probe, in C DNA or genomic DNA library scanning to find related genes. Study on the application of TALL-PCR technology in tobacco gene function, can promote the tobacco functional genomics study better. TAIL-PCR technology as a technology is simple, reaction product is high sensitive, high specificity, good reproducibility, can obtain the target fra