神经肽修复重建作用PPT.ppt

* 神经肽在AT ??细胞损伤修复重建中的作用 重庆医科大学儿童医院 许峰 目的意义 氧疗是抢救新生儿呼吸衰竭最有效的方法 氧化应激性肺损伤疾病, BPD 在存活的早产儿中可达60%以上 严重影响患儿的肺功能和肺发育 目前尚无有效治疗方法 成为呼吸病学和儿科学的重要课题 是我国优生优育提高人口素质战略国策的需要。 目前高氧肺损伤防治的根本难题是不能解决损伤的 AT-??细胞重新再生, 以致肺纤维化病变和瘢痕生成。 当前国内外研究主要集中在如下几个方面 ①尝试用肺表面活性物质蛋白 ②上皮干细胞定向分化 ③利用基因工程技术所生产的生长因子药 ⑤细胞外基质（ECM）的积聚 ⑥更换机械通气模式、激素、表面活性物质替代疗 法、免疫疗法等均收效甚微。 国内外研究现状和存在的问题 为什么会出现这种困惑现象？ 过去研究关注如何阻断有害因素对AT-??细胞的损害 如何保护和促进AT-??细胞修复重建研究甚少 AT-??细胞的主动修复理论开始引人注目 寻找促进AT-??细胞主动修复的新型调控因子成为新 切入点。 神经肽类递质可能是AT-??细胞新的调控因子 立论依据: ①神经肽类递质(Neuropeptides )：细胞调控因子或细胞外信使分子,是神经、内分泌和免疫共同识别的信号物质之一。 ②研究证实：在成体皮肤创伤愈合中已证实神经肽不仅启动愈合早期的神经源性炎性反应,同时对修复细胞增殖、再生和瘢痕形成密切相关 有理由推测神经肽类递质可能是AT-??细胞新的调控因子，有可能调控AT-??细胞再生修复重建。 从胎儿无瘢痕愈合中得到的启迪 立论依据: ①纤维化病变和瘢痕生成是肺损伤修复中最大的难题。 ②肺损伤向无瘢痕愈合将是未来人类追求的理想修复模式, ③“胎儿无瘢痕愈合”概念的提出在发育学和修复学之间为我们解决上述困惑架起了一座桥梁, ④别人的研究: 肺发育与成熟的过程中, 神经肽的含量 均有时空变化。 ⑤我们的研究 也发现在相同高氧浓度的暴露下，新生鼠较 成年鼠纤维化病变轻，损伤修复好 ⑥肺神经肽及其受体参与胎儿期肺部的发育 调控，能诱导成纤维细胞和内皮细胞增殖及 分化，并参与呼吸道自我修复过程及抑制炎 症扩散的作用 有理由推测神经肽对不同发育阶段AT-??细胞 的调控可能存在差异，从而导致损伤修复重 建结局的大相径庭。 研究突破口:寻找促进AT-??细胞修复的调控因子 研究对象:不同发育阶段的肺组织和AT-??细胞 研究内容:神经肽类递质和AT-??细胞修复再生 研究角度:从发育学和神经内分泌学的角度研 究肺损伤修复 创新之处和立志要探索的问题 人工干预肺损伤向无瘢痕愈合的工作假设 ①神经肽类递质可能是AT-??细胞新的调控因子 ②神经肽类递质调控AT-??细胞可能涉及MAPK信号通路 ③神经肽类递质对不同发育阶段AT-??细胞的调控可能存在差异 ④神经肽类递质调控肺损伤向无瘢痕愈合,可能是临床治疗中的新目标 技术路线—体外细胞水平研究 AT-Ⅱ （早产、 新生、 成年） 正常对照组 ROS刺激组 （不同浓度、时间） 正常对照＋神经肽组 ROS＋神经肽组 （不同浓度、时间） 3H?TdR 掺入法 MTT法 组织化学法 荧光染色电镜法 流式细胞术 免疫沉淀法 Western blot Northern blot AT??型细胞形态和 周期、数量变化 活细胞数目 AT??型细胞分化度 凋亡的形态学 DNA Ladder 凋亡细胞数 bcl-2,Bax,P53, Caspase3 ERK/JNK/p38活性及 蛋白质量， C-Jun、C-fos mRNA 技术路线—体内整体动物研究 大鼠 （早产、 新生、 成年） 正常对照组 高氧暴露组 对照＋神经肽组 高氧＋神经肽组 放免法 组织化学法 光镜、电镜、 生化法 原位杂交法 SP、CGRP含量变化 SP、CGRP分布变化 肺组织病理学检查 BALF分析 ERK、JNK、P38在 肺组织的表达和分布 团队和人才培养 场地保障： 申请者所在单位重庆医科大学儿科学为国家级重 点学科（中华人民共和国教育部教研函[2002]2 号，学科代码100202），完成本实验的场地在重 庆医科大学儿科研究所（重庆市重点实验室） 人员保障： 研究小组人员包括教授、博士、硕士生组成,并按 研究计划确定了固定工作时间。 申请者: 有一系列前期研究工作基础，单任多项学术任职 是该领域学术带头人 预期成果 为神经调控促进肺损伤向无瘢痕愈合假设提供理论 依据，有可能带来高氧肺损伤和BPD治疗理论上的 新进展。 本研究涉及多个交叉学科和领域， 研究成果对一 系列重要疾病的基础和应用研究及临床实践均有