第05章 体内药物分析1PPT.ppt

第五章 体内药物分析;概述;三、体内药物分析的特点 ——由分析对象的特点所决定：;;（一）血液;（三） 唾液;; 缺点： 唾液是各腺体分泌的的混合液体，其组成发生经时变动。 S/P只有少数药物是恒定值。 蛋白结合率较高的药物，药物在唾液中的浓度低。 对有些患者（昏迷）不能采集唾液样品。;二、生物样品的贮存与处理;（二）有时，还应考虑加入稳定剂： 酶抑制剂：一些酯类药物，如普鲁卡因、阿糖胞苷，易受血浆酯酶作用而发生水解，则应在采样后立即加入酶抑制剂如氟化钠等。 抗氧化剂：一些易氧化的药物，可加入维生素C或其它抗氧化剂。如血浆中儿茶酚类药物常规保存仅4周，若加入适量VC，则能保存10周。;第二节 生物样品的预处理与制备;（一）将药物从缀合物（尿）或结合物中释放出来，以测定药物的总浓度 （二）将微量药物从复杂的介质中纯化、富集出来 （三）防止分析仪器的污染，提高测定灵敏度和选择性等;（一）经有机破坏的方法; （二）去除蛋白质;去除蛋白质有以下几种方法;3. 加入强酸 10%三氯醋酸、6%高氯酸 4. 加入含锌盐及铜盐的沉淀剂 5. 超滤法 蛋白质大分子不能通过半透膜 游离药物 6. 酶水解法 枯草杆菌酶，贵，时间长 少用 7. 加热法 少用 ;（三）分离、纯化与浓集;1. 液-液萃取法（LLE）;采用LLE要考虑的几个问题;（3）水相的PH值 主要由药物的pKa决定！　　 　　　　　　　　　　（丙戊酸的pKa4.95 ）;由于血药浓度较低，提取时需浓集 传统的浓集方法主要有两种：一种是在末次提取时加入的提取液尽量少，使被测组分提取到小体积溶剂中，然后直接吸出适量供测定。 另一种是挥去提取溶剂后，再用少量适合的溶剂溶解后测定。; 衡量提取方法优劣的一个重要指标就是提取回收率，它是指药物从生物样品中被分离出来用于测定的比例，一般应高于60%; 液-液回提（多次提取）;文献上常提到的LLE的缺点;;SPE填料;固相萃取操作一般有五步： 活化——甲醇润湿小柱，活化填料，除去杂质并创造一定的溶剂环??。 平衡——水或适当缓冲液冲洗小柱。 上样——将样品用一定的溶剂溶解，转移入柱并使组分保留在柱上。弃去废液 淋洗——水或缓冲液最大程度除去干扰物。 洗脱——用小体积的溶剂将被测物质洗脱下来并收集。;29;亲水型填料;离子交换树脂; 用固相微萃取一气相色谱联用分离、分析尿中痕量毒鼠强。方法的线性范围为10一500ng/ml，最低检出浓度10ng/ml， RSD 1 0%。用该法监测了1例毒鼠强中毒幼儿尿中毒鼠强含量，在中毒后 3 个月内仍从尿中检出毒鼠强成分，适用于临床和法庭毒物分析。 ;SPE优点：1、不发生乳化；2、适应的极性范围较广；3、提取效率高；4、方便快速；5、溶剂用量少；6、易于自动化；7、室温下操作，尤其适于处理挥发性及对热不稳定的药物。 目前，商品化固相提取小柱（cartridge）的应用已比较普遍。;三种方法的优缺点比较;; 值得注意的是，目前对缀合物的分析，逐渐趋向于直接测定缀合物的含量，以获得体内以缀合物形式存在的量，以及当排出体外时，缀合物占所有排出药物总量的比率，从而为了解药物代谢情况提供更多的信息。;（四）化学衍生化;1. GC 法中的化学衍生化法; 常用的烷基化试剂：碘庚烷、叠氮甲烷、氢氧化三甲基苯胺（TMAH）等； 常用的酰化试剂：乙酸酐、丙酸酐等； 硅烷化试剂：三甲基氯硅烷（TMCS）、双-三甲基硅烷乙酰胺（BSA）、双-三甲基硅烷三氟乙酰胺（BSTFA）、三甲基硅咪唑（TMSI）等。; 具有光学异构体药物的分离可采用不对称试剂，使其生成非对映异构体衍生物，然后用GC法进行分析测定。常用的不对称试剂有：（S）-N-三氟乙酰脯氨酰氯、（S）-N-五氟乙酰脯氨酰氯等。;2. HPLC法中化学衍生化法; 进行化学衍生化反应要满足如下要求： ①能迅速、定量地进行，且反应条件温和； ②选择性高，最好只与待测成分反应，衍生化试剂和副产物不干扰样品的分离和测定； ③衍生化试剂方便易得，通用性好。; 　从衍生时是否与HPLC 联机，化学衍生化法分为在线(on line) 和离线(off line) 两种。 　　从衍生化反应发生的场合，可以分为柱前衍生化法、柱后衍生化法。; 柱前衍生是在色谱分离前，预先将样品制成适当