第五章 基因表达2：蛋白质翻译PPT.ppt

A P E 30S 5’ mRNA Free tRNA Polypeptide Release factor Ribosomal Subunits RF GTP 肽链的终止过程 思考： 蛋白质合成是一个高能耗能的过程，蛋白质合成过程中哪些步骤需要GTP的水解作用？ 二、真核生物蛋白质合成过程 真核生物蛋白质合成过程类似于原核细胞的蛋白质生物合成过程，最大的区别在于翻译起始复合物形成，以及各阶段所使用的蛋白质因子的种类和数量的不同。 （一）真核生物蛋白质的合成起始特点 ① 核糖体80S，由40S和60S两个亚基组成。 ② 有较多的翻译起始因子 ③ mRNA 5′端具有m7Gppp帽子结构， 3′端poly (A)尾巴结构，两者都参与起始复合物的形成 ④ 起始tRNA为Met-tRNAiMet，不甲酰化 ⑤ mRNA是单顺反子 eIF5B：替换因子 真核生物中翻译起始因子的种类和功能： eIF4B、eIF4F：识别帽子结构 eIF4E、eIF4A：形成复合体 eIF6、eIF3、eIF4C：结合核糖体的亚基 Eif2、Eif2b：输送起始tRNA 真核生物翻译起始复合物形成(区别原核生物) 原核生物：30S小亚基首先与mRNA模板相结合，再与fMet-tRNAfMet结合，最后与50S大亚基结合，形成70S起始复合物。 真核生物：40S小亚基首先与Met-tRNAiMet相结合，再与模板mRNA结合，最后与60S大亚基结合生成80S起始复合物。 原核生物翻译起始复合物形成过程 Internal Initiation model A U G 5 3 IF-2 GTP IF-2 -GTP GDP Pi IF-1 IF-3 真核生物翻译起始复合物形成过程 1 7mGpppG AAAAAAAAA PABP 4G 4A AUG AGU 4E A P E 60S 5 4 3 2 Scanning model 4B 2 3 M 1A 40S 5B M （二）肽链的延伸和终止 延伸：真核生物肽链的延伸需要EF-1和EF-2两个延伸因子 终止：真核生物只有一个终止因子（eRF） 原核生物延伸因子：EF-T (EF-Tu, EF-Ts)、 EF-G 原核生物终止因子：RF1、RF2、RF3 三、 蛋白质前体的加工与折叠 1、N端fMet或Met的切除 无论原核生物还是真核生物，N端的甲硫氨酸往往在多肽链合成完毕前就被切除。 2、二硫键的形成 mRNA中没有胱氨酸密码子，而不少蛋白质都含有二硫键。蛋白质合成后往往通过两个半胱氨酸的氧化作用生成胱氨酸。 （一）蛋白质前体的加工 二硫键的形成 3、特定氨基酸的修饰 氨基酸侧链的修饰作用包括磷酸化（如核糖体蛋白质）、糖基化（如各种糖蛋白）、甲基化（如组蛋白、肌肉蛋白质）、乙基化（如组蛋白）、羟基化（如胶原蛋白）和羧基化等等。 发生在小牛组蛋白H3前35个氨基酸残基中的4种化学修饰 蛋白质的磷酸化 4、切除新生肽链中非功能片段 ① 将多聚蛋白切开，成为几个成熟蛋白； ② 新生肽链N和C端多余部分的切除； ③ 切除中间部分，余下的部分由二硫键链接； ④ 蛋白质的内含肽的剪接 新生蛋白质经蛋白酶切割后变成有功能的成熟蛋白质。 左：新生蛋白质在去掉N端一部分残基后变成有功能的蛋白质； 右：某些病毒（反转录病毒）可合成无活性的多聚蛋白质，经蛋白酶切割后成为有功能成熟蛋白。 前胰岛素原蛋白翻译后成熟过程示意图 蜂毒蛋白只有经蛋白酶水解切除N-端的22个氨基酸以后才有生物活性。 2） 错义突变校正 校正tRNA识别错义突变位点，通过插入原来的氨基酸或其它的氨基酸而校正错义突变，从而能完全恢复或部分恢复蛋白质活性 。 ① tRNA反密码子发生突变， ② tRNA其他的结构变化或是氨酰tRNA合成酶的突 变而改变了其荷载氨基酸的变化。 有两种方式可以形成校正tRNA： 3）校正突变的特点： ① 不是所有终止密码子的校正都产生有功能的蛋白质，起到校正的作用关键是要看氨基酸取代的情况。 ② 校正的作用不可能是完全的，校正的效率很低，通常为1~5%。 4、氨酰-tRNA（AA-tRNA）合成酶（AARS） AA-tRNA合成酶：是一类催化氨基酸与tRNA结合的特异性酶。 其反应式如下： 实际上包括两步反应： 第一步是氨基酸活化生成酶-氨基酰腺苷酸复合物。 第二步是氨酰基转移到tRNA 3 末端腺苷残基的2 或3-羟基上。 研究发现，被错误活化的氨基酸不会被结合到相应的tRNA上，而是被酶本身水解，即活化阶段产生的误差在后一阶段被再次校正了。 三、核糖体 核糖体是由