第八章 机体免疫功能的检测技术PPT.ppt

第二节 体液免疫功能的检测 一、免疫球蛋白的定量检测 二、外周血B细胞数目的检测 三、外周血B细胞功能的检测 一、免疫球蛋白的定量检测 1. 单向免疫扩散试验 2. 免疫比浊法 3. ELISA 单相免疫扩散试验 第二节 体液免疫功能的检测 一、免疫球蛋白的定量检测 二、外周血B细胞数目的检测 三、外周血B细胞功能的检测 二、 外周血B细胞数目的检测 1. 免疫荧光技术 2. 花环试验 3. 流式细胞术 B细胞EA、EAC花环试验 第二节 体液免疫功能的检测 一、免疫球蛋白的定量检测 二、外周血B细胞数目的检测 三、外周血B细胞功能的检测 三、外周血B细胞功能的检测 1. B细胞增殖试验 2. 溶血空斑试验 3. ELISPOT 1. B细胞增殖试验 非特异性刺激物 （美洲商陆） 特异性刺激物 （抗原） 3H-TdR掺入法 MTT法 形态学计数法 溶血空斑试验 第一节 免疫细胞的分离与纯化 第二节 体液免疫功能的检测 第三节 细胞免疫功能的检测 第四节 细胞因子及其受体的 　　　　检测技术 第八章　机体免疫功能的检测技术 第八章 机体免疫功能的检测技术 第一节 免疫细胞的分离与纯化 第二节 体液免疫功能的检测 第三节 细胞免疫功能的检测 第四节 细胞因子及其受体的 　　　　检测技术 第八章　机体免疫功能的检测技术 第一节 免疫细胞的分离与纯化 一、细胞密度差异分离法 二、细胞粘附与吞噬能力差异分离法 三、细胞渗透压敏感差异分离法 四、细胞表面标志分离法 五、其他细胞的分离和收集 根据不同细胞存在的密度差异即比重不同而分类。 人外周血细胞的密度为：红细胞 1.093，粒细胞 1.092，单个核细胞1.075～1.090，血小板 1.030～1.035。 1．自然沉降分离法 2．密度梯度离心法 一、细胞密度差异分离法 上 层：淡黄色血浆 底 层：红细胞 灰白层：白细胞 1．自然沉降分离法 （1）Ficoll密度梯度离心法 即聚蔗糖－泛影葡胺密度梯度离心法（ficoll-hypaque density gradient centrifugation) Ficoll分层液的密度为：1.077±0.001 用于从外周血中分离单个核细胞 用Ficoll分离外周血单个核细胞 95% 2000rpm 20 min 血浆 单个核细胞 淋巴细胞分离液 红细胞 粒细胞 （2）Percoll密度梯度离心法 Percoll即聚乙烯吡咯烷酮包被的硅胶混悬液的商品名，为一种无细胞毒无刺激的新型连续密度梯度分层液。 Percoll原液密度1.135 用于从单个核细胞中分离单核细胞、淋巴细胞 用Percoll分离单核细胞和淋巴细胞 75% 98% 第一节 免疫细胞的分离与纯化 一、细胞密度差异分离法 二、细胞粘附与吞噬能力差异分离法 三、细胞渗透压敏感差异分离法 四、细胞表面标志分离法 五、其他细胞的分离和收集 单核/巨噬细胞具有较强的粘附能力，在37℃和Ca2+存在条件下，能主动粘附在玻璃、塑料、尼龙毛、棉花纤维或葡聚糖凝胶的表面，据此可建立许多从单个核细胞悬液中去除单核/巨噬细胞的方法，藉以获得高纯度的淋巴细胞。 1．细胞粘附力差异分离法 2．细胞吞噬能力差异分离法 二、细胞粘附与吞噬能力差异分离法 单核/巨噬细胞具有较强的粘附能力，在37℃和Ca2+存在条件下，能主动粘附在玻璃、塑料、尼龙毛、棉花纤维或葡聚糖凝胶的表面，据此可从单个核细胞悬液中去除单核/巨噬细胞，获得高纯度的淋巴细胞。 Ｂ细胞也有一定的粘附能力，能粘附于尼龙纤维表面，可以将Ｔ细胞与Ｂ细胞分开。 1．细胞粘附力差异分离法 （1）粘附贴壁法： 　　单个核细胞放在玻璃或塑料平皿中于37℃温 箱静置1h，收集游离的淋巴细胞。 （2）吸附柱过滤法： 　　单个核细胞加入玻璃纤维或葡聚糖凝胶 （Sephadex-G10），收集未吸附的淋巴细胞。 淋巴细胞放入尼龙纤维，可以吸附B细胞， 游离细胞为T细胞。 磁铁吸引法： 单核/巨噬细胞具有吞噬特性，可加入直径为3um的羰基铁颗粒或乳胶颗粒，待单核/巨噬细胞充分吞噬颗粒后，再用磁场吸附或通过密度梯度离心，获得较纯的淋巴细胞。 2．细胞吞噬能力差异分离法 第一节 免疫细胞的分离与纯化