第六章 生物信息的传递(下)——翻译PPT.ppt

在原核细胞如E.coli细胞，已发现了以Met- tRNAfMet为底物的转甲酰酶。该甲酰基的存在，阻碍了fMet以其α-NH2与其它氨基酸形成肽键的可能性，从这个意义上讲fMet必然位于肽链的N端。然而，当肽链合成达15-30个氨基酸碱基时，又经蛋氨酸肽酶的作用将N端的fMet水解掉。故肽链合成后，其N端为fMet仅占30%，70%的肽链N端没有fMet。 2) IF2能促使fMet-tRNAfMet与起始密码子结合，或者说IF2能与tRNAfMet反应。相反，IF2不能与tRNAmMet反应，而tRNAmMet只能与延长因子TU(EF-TU，见下述)反应。在形成30S前起始复合物过程中，必须有IF2参与。因此，IF2与tRNAfMet的特异性反应亦有助于保证tRNAfMet与起始密码子的结合。 3) SD(Shine-Dalgarno)顺序的作用。在mRNA分子中起始密码子的上游8-13个核苷酸处有一段富含嘌呤核苷酸的顺序，它可以与30S亚基中的16SrRNA3端富含嘧啶的尾部互补，形成氢键结合，因此有助于mRNA的翻译从起始密码子处开始。上述mRNA分子的序列特征1974年由J.Shine和L.Dalgarno发现，故称为SD顺序。后来在E.coli的多种mRNA分子中证实均存在SD顺序。 大肠杆菌mRNAs的SD顺序与16SrRNA的3-端的互补性 16S rRNA 3HOAUUCCUCCAUAG..................................5 噬菌体MS2外壳蛋白 5.....UCAACCGGAGUUUGAAGCAUG.....................3 复制酶5.....CAAACAUGAGGAUUACCCAUG......................3 噬菌体λCro5AUGUACUAAGGAGGUUGUAUG............................3 galE5...AGCCUAAUGGAGCGAAUUAUG.........................3 β-内酰胺酶5UAUUGAAAAAGGAAGAGUAUG.............................3 脂蛋白5.......AUCUAGAGGGUAUUAAUAAUG......................3 核糖体蛋白质S125.......AAAACCAGGAGCUAUUUAAUG......................3 RNA聚合酶β5.......AGCGAGCUGAGGAACCCUAUG......................3 trpE5.......CAAAAUUAGAGAAUAACAAUG......................3 4. 关于EF 原核生物含有2种延长因子：EF-T和EF-G。是由F.Lipmann等和Allender等于60年代初首先从E.coli细胞分离出的。 EF-T由EF-Tu和EF-Ts成份组成，Tu表示对热不稳定(unstable for temperature)，Ts表示对热稳定(stable for temperature)。EF-Tu、Ts和EF-G的分子量分别为4500，30000和80000，与GTP (或GDP)均有亲和性。EF-Tu含量相当丰富，其拷贝数相当于胞内aa-tRNA分子的数目。在E.coli中EF-Tu的稳定性很高，但没有活性，EF-Tu只有与GTP形成EF-Tu-GTP复合物才能与aa-tRNA结合，并且需EF-Ts的参与。 5. 核糖体与mRNA的相对移动 肽链的延长伴随着核糖体与mRNA的相对移动。这种移动最可能是核糖体的主动移位即所谓核糖体机械移动假说。该学说认为机械性移位是核糖体本身固有的，不被任何外部蛋白质因子介导。那么，移位的能量从何而来?在进位和移位二步中的GTP有何作用呢? 　　在延长步骤中，核糖体的工作过程中可有三步获能过程：一是转肽作用，受核糖体本身介导；二是EF-Tu介导GTP水解为GDP和Pi；三是由EF-G介导的GTP水解。 根据热力学测定，仅转肽步骤的自由能(△G)的净获得就是相当多的(约7kcal/mol)，足以供给核糖体延长因子-GTP反应系统中核糖体的正常工作。 现在认为，由EF介导的二步GTP水解的能量主要用于三个方面： [1]在延长步骤中，加速核糖体的循环速度； [2]增强核糖体对抑制剂的抵抗力； [3]有利于翻译，有保真性(fidelity)。 核糖体机械移动的真正内在机制是什么?现在