从特定的细胞中分离与核糖体结合的mRNA幻灯片.pptVIP

从特定的细胞中分离与核糖体结合的mRNA 核酸的分离与纯化技术是生物化学和分子生物学中的一项基本技术。其中，RNA，尤其是mRNA的制备与分析，在了解基因表达方面是分子生物学的研究的关键步骤。 大部分真核mRNA分子的3’端存在一个20～30个多聚腺苷酸残基poly（A），可以用磁珠法或者寡聚（dT）的纤维素亲和而纯化。 磁珠法 一 摘要 基因表达谱技术可以分析来自器官，组织和细胞的转录产物。然而，由于器官和组织是由各种类型的细胞组成，且有各自的基因表达模式，因此这些方法受到了限制。 为了鉴定复杂组织中某一细胞类型的转录组，研究人员用物理方法，原位杂交或者免疫组织化学的方法分离不同类型的细胞，但都有一定的局限性。 本文我们描述一种快速有效地分离体内任何细胞类型中与核糖体结合的mRNA转录组的方法。 我们建立了一个小鼠系---RiboTag（Tag Ribosomes） ，带有一个Rpl22等位基因，该基因C端的一个野生型外显子4的左右各有一个Lox P位点，其后还有一个带有3个血凝素（HA）抗原决定簇拷贝的外显子4。 在特定细胞类型中，多聚核糖体与单克隆抗体（抗原为HA）的免疫沉淀反应就能够分离与核糖体结合的mRNA转录组。 二 简介 利用转基因技术使抗原决定簇标签表达或利用绿色荧光蛋白（GFP）等报告基因克服了在分析复杂组织中特定细胞类型的转录组中遇到的困难，因此研究者可以