3 基因表达检测_PPT课件.pptVIP

第三部分：基因表达检测 基因表达检测的应用范畴 检测自然变异等位基因的表达差异； 检测突变体基因功能的丧失或获得； 检测转基因的表达：OX 抑制 突变。 基因表达检测的技术手段 RT-PCR (Reverse transcription PCR) Real-time PCR=qRT-PCR Northern Blotting RT-PCR (qRT-PCR) RNA抽提 cDNA 反转录 基因特异性引导 Oligo(dT)引导 随机六核苷酸引物引导 PCR Northern Blotting 基因表达分析的一般流程 Northern Blotting Invented by Kary Mullis in 1983 and Awarded Nobel Prize for Chemistry in 1993 基因表达水平 mRNA 反转录生成的cDNA可作为PCR的模板进行扩增称为RT-PCR； RT-PCR比Northern杂交更灵敏，对RNA的质量要求较低，操作简便，它是在转录水平上检测基因时空表达的常用方法。 实验原理 总RNA 提取 RNA的制备与分析对于了解基因在转录水平上的调节和cDNA的合成都是必须的； RNA的纯度和完整性对于Northern blot, RT-PCR和cDNA文库的构建等分子生物学实验都至关重要； RNA分离的方法很多，最关键的因