2009CB940900-发育及生殖相关的小分子化合物库及相关技术平台的建立.docVIP

项目名称： 发育与生殖相关的小分子化合物库及相关技术平台的建立 起止年限： 依托部门： 一、研究内容 拟解决的关键问题随着基因转染诱导体细胞重编程为干细胞的成功，干细胞研究进入了一个新的阶段。然而采用化学生物学的策略，将小分子化合物用于干细胞的自我更新、定向分化以及体细胞重编程等方面的研究却仅在近几年才刚刚起步。本项目拟围绕小分子化合物调控干细胞这一目标，解决如下科学问题： 能否应用小分子化合物维持干细胞全能性、诱导干细胞定向分化及体细胞重编程？目前只有为数不多的小分子化合物被报道与维持干细胞自我更新或促进定向分化相关，但这些化合物还不足以完全取代培养基中的生长因子，且诱导分化的百分比也不能满足临床应用的需要。而在体细胞重编程研究中，小分子化合物增强转录因子诱导效率代转录因子的研究还未有报道。能否应用小分子化合物维持干细胞全能性、诱导干细胞定向分化及体细胞重编程是本项目拟解决的一个关键科学问题。要解决这个问题我们需要建立具有一定结构多样性及靶标针对性的小分子化合物库及灵敏、稳定的活性鉴定和筛选模型。 干细胞调控相关的小分子化合物库的建立。利用筛选模型，通过对化合物库的高通量筛选是获得具有生物活性的小分子化合物的有效途径。国内也有单位进行类似筛选以获得小分子药物先导化合物。但目前国内的化合物库容量比较小，而且化合物挑选也是随机进行，因此活性化合物的命中率非常低。国际上目前已开发出针对一类配体的化合物库，如针对G蛋白偶联受体、核受体、离子通道或激酶的化合物库，但针对干细胞调控的小分子化合物库尚未报道。因此干细胞调控相关的小分子化合物的挑选及库的建立也是本项目拟解决的一个关键科学问题。我们将通过生物/化学信息学及计算生物学，建立虚拟筛选平台，挑选可能与干细胞调控关键蛋白或通路有相互作用的小分子化合物或天然产物，用于活性研究；另我们也将建立合成平台，对已有报道的或我们筛选发现的活性化合物进行结构改造和修饰，合成衍生物库，用于活性筛选。通过化学与生物学的结合建立干细胞调控相关的小分子化合物库。 干细胞自我更新、定向分化及体细胞重编程模型的建立。有了具有一定结构多样性及靶标针对性的小分子化合物库，还必需建立灵敏、稳定的活性鉴定和筛选模型，才能从库中发现具有干细胞调控活性的化合物。因此干细胞自我更新、定向分化及体细胞重编程模型的建立是本项目拟解决的另一个关键科学问题。我们拟在已有的人、猴、小鼠胚胎干细胞系培养技术平台基础上，利用形态、标记分子、干细胞多能因子Oct4/Nanog以及细胞的表观遗传修饰状态等方面的变化来综合评价表达来评价干细胞的多能性或分化状态，从而建立活性鉴定模型。主要研究内容建立生殖和发育相关特别是干细胞研究相关的小分子化合物及天然化合物库，为相关领域的科学家提供研究及活性筛选用的化合物资源： 通过文章、专利等检索收集已有报道的、与干细胞诱导、增值及定向分化相关的小分子化合物信息，通过购买或合成收集此类已有报道活性的化合物，为科学家提供相关研究的标准化合物； 通过对干细胞相关信号转导通路或其中重要蛋白质的计算生物学研究及虚拟筛选，挑选并收集可能具有干细胞调控功能的天然化合物，扩充化合物库，为进一步的活性鉴定实验提供材料； 挑选、收集具有结构新颖性及成药性的小分子化合物扩充化合物库，为进一步的活性鉴定实验提供材料； 利用网络和电子技术，建立我国干细胞相关化合物资源的中心数据库系统（包括网站、综合数据库和多层多点的操作管理界面）以汇总和共享有关小分子化合物调控干细胞的信息；推广小分子化合物调控干细胞的知识、技术、操作经验等； 建立化合物库的管理运行规范、建立合理的化合物资源共享机制。 建立稳定的小分子化合物调控干细胞的活性鉴定和筛选平台，研究小分子化合物在干细胞全能性维持、定向分化及体细胞向干细胞重编程方面的功能； 建立维持干细胞多能性小分子化合物的筛选平台：在已有的人、猴、小鼠胚胎干细胞系培养技术平台基础上，按形态、表面分子SSEA和核内因子Oct4/Nanog的表达来评价干细胞的多能性状态，通过小分子化合物对干细胞短期和长期培养的影响，来检测、验证其功能，同时检测它们对干细胞的毒性； 建立诱导干细胞定向分化的小分子化合物筛选平台：在已有的胚胎干细胞系培养和分化技术平台基础上，加入小分子化合物与胚胎干细胞共培养，利用各种细胞的特定分子标记建立定向分化筛选模型，从化合物库中筛选出能促进或阻断定向分化过程的小分子化合物并以之为探针进行蛋白靶标鉴定和分化机制的研究； 建立诱导iPS的小分子化合物筛选平台：我们已利用反转录病毒导入了4个转录因子基因（Oct-4, Sox2, c-Myc和KLF4），成功地进行了人与小鼠体细胞向iPS干细胞的诱导。在此基础上，我们将通过小分子化合物的共孵育来调节转录因子对iPS的