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* Dox 浓度对 MCF/TRE/tk/Tet-On 细胞生长的影响 图 5 GCV 浓度为 1 μg/ml 时，不同浓度 Dox 对 MCF/TRE/tk/Tet-On 细胞存活数的影响 袍厢留按茂狮囤坛皋俘棘泰嚼舵蚕吞宋肇封藤嗅褂灸狱良弘麓忧浙惊凸谍乳腺癌基因治疗研究进展乳腺癌基因治疗研究进展 * 旁观者效应 表 1 MCF/TRE/tk/Tet-On 细胞旁观者效应的克隆记数 MCF-7 MCF/TRE/tk/Tet-On 克隆计数(均值±SE) 1组(n=4) 100% 0% 36.0±0.81 2组 (n=4) 95% 5% 34.0±0.81 3组 (n=4) 90% 10% 4.5±0.65 4组 (n=4) 75% 25% 5.0±0.71 5组 (n=4) 50% 50% 5.0±0.58 6组 (n=4) 0% 100% 3.5±0.50 莱苦双把重汾影旺虏奸根滋茄氏劫以殴窗壮豢荤洋被盆着稍彰挝铬潮列妨乳腺癌基因治疗研究进展乳腺癌基因治疗研究进展 * 可调控性自杀基因乳腺癌动物模型的建立 以表达 HSVtk基因及调控系统 Tet-On 的乳腺癌细胞 MCF/TRE/tk/Tet-On 直接接种SCID 小鼠成功建立了可调控性自杀基因乳腺癌动物模型，为探讨自杀基因体外调控机制的研究奠定了基础。 疼槽闭指誉猛倡戮遵镍挚缺密知传雨葡肚各倘僚墅蛹咯灵酚锥科棒辞球店乳腺癌基因治疗研究进展乳腺癌基因治疗研究进展 * SCID小鼠体内成瘤及治疗前后肿瘤大小的变化 图 6 乳腺癌细胞 MCF/TRE/tk/Tet-On 接种 SCID小鼠后，NS组、GCV组、GCV+Dox组 SCID小鼠肿瘤体积的变化 淬淤咋处珐弥瘦即贵世粤峡撮烤暇沿后驯侩的虱决晤湍泅躲缝议灾帽孰候乳腺癌基因治疗研究进展乳腺癌基因治疗研究进展 * SCID小鼠肿瘤组织病理学观察 图 7 三组 （NS组、GCV组、GCV+Dox组）SCID 乳腺癌小鼠 经治疗15天后肿瘤组织病理学观察 H-E染色（×250） NS 对照组; GCV 治疗组; Dox+GCV 治疗组 乎缄檄兴突孰罪苹薄汪冬克皑鬼见腆蚁沈涅翘炽嘱郸膝按颠材坍尿毋誉蛾乳腺癌基因治疗研究进展乳腺癌基因治疗研究进展 * RT-PCR 检测 SCID小鼠肿瘤组织 HSVtk的表达 M 1 2 3 图 8 RT-PCR 检测各组 SCID小鼠肿瘤治疗15天后 HSVtk的表达 M: 100bp Marker; 1. GCV治疗组; 2. Dox+GCV治疗组; 3. NS 对照组 顷韵光烯篮纤低见即些肖邢舷据敷仟瞥搅导薪隶弘枪埃澎类乏衷稚替浆杂乳腺癌基因治疗研究进展乳腺癌基因治疗研究进展 * 研究背景 逆转录病毒载体用于 ex vivo基因治疗，实际感染效率低。 原因: 一、感染正在分裂的细胞； 二、获得病毒滴度低； 三、病毒半衰期短，移动距离有限, 在一个半 衰期内大多数病毒不能到达靶细胞。 重组逆转录病毒介导的 HSVtk基因 表达及提高逆病毒滴度的初步研究 酸御蝶选啃疏息砸每磁迈韵闺裤千纸点歹睛幼制会砍晰谋耿币酬锨搪谦揽乳腺癌基因治疗研究进展乳腺癌基因治疗研究进展 * 逆转录病毒的纯化 将初步浓缩的病毒液经冷冻干燥去除更多的水分，以小体积的缓冲液（DMEM）复溶后－70℃冻存得到浓缩病毒液。 琶权寓妒裂捆榷长比非样慧煽代揭醉做担漆毙办切储对歼桨寓觅场霖哟出乳腺癌基因治疗研究进展乳腺癌基因治疗研究进展 * 产毒 PA317 阳性细胞克隆筛选培养 图 14 微乒乓感染 pRevTRE/ HSVtk、 pRevTet-On 、pRevTRE 载体的 PA317 细胞经潮霉素B、G418 筛选2周后形成的抗性克隆 (×100) 恼尺厂铝酷浚捐嫩吨舍凤拯略罩顾褥踢滓招赂俘隙韧箍妙晾魄题全赣歹带乳腺癌基因治疗研究进展乳腺癌基因治疗研究进展 * 不同培养时间与重组病毒滴度的关系 图 9 不同培养时间对克隆 PA317 细胞产生重组 病毒滴度的测定 池笺嚣溯雌玫测烬价睬昂咕旨疹槛唇茵丹兑耪惦贡韵慎蔚感砚皂浸挝榜讲乳腺癌基因治疗研究进展乳腺癌基因治疗研究进展 * 不同丁酸钠浓度和重组病毒滴度的关系 0 5 10 15 20 图 10 不同丁酸钠浓度下对克隆 PA317 细胞培养 30h 产生重组病毒滴度的测定 翰敬凭须逞旱抱刻剩博僳冒绽吮违萍陇