肿瘤个体化治疗基因检测教程 ppt课件.pptVIP

EGFR基因测序突变类型： EGFR 第18, 19 ,20, 21外显子和第一内含子（CA） EGFR 19:容易发生缺失 EGFR 21:L858R EGFR(CA):(CA)n≤16，EGFR非突变NSCLC患者服用TKI类药物具有短期疗效 EGFR 20:T790M 突变会使患者对EGFR-TKI 类药物产生耐药 EGFR18测序图 EGFR19测序图 EGFR20测序图 EGFR21测序图 EGFR intron 1测序图 RNA表达量结果图及分析 使用仪器为：ABI7900荧光定量PCR仪，分析软件为：RQ Manager 1.2 ERCC1 血液 石蜡组织 BRCA1 血液 石蜡组织 RRm1 血液 石蜡组织 VEGF 血液 石蜡组织 血液 石蜡组织 TS 第六章 资料汇总，资料库建立 将申请单，诊断报告按基因申请号装订成册 按申请项目汇总电子版诊断报告，详细记录病人资料，做患者后续随访纪录治疗效果。 统计总数，计算突变率，统计突变类型。可做纵向质控。 方便后续资料检索查阅 R10-137 王XX 女 55岁 胃镜标本 不排除腺瘤 检测项目：RRM1 欲做术前介入化疗（吉西他滨）胃镜标本 G10-425 周XX 女 48岁 盐城一院，201010011A 细支气管肺泡腺癌,左上肺结节，肺叶切除 刮片时沿内线刮 生物信息学相关网站 肿瘤个体化治疗基因检测项目 检测项目 涉及肿瘤 预测内容 样本类型 JAK-2 突变 外显子 12，14 真性红细胞增多症，原发性骨髓纤维化、原发性血小板增多症 辅助临床诊断 2mL抗凝血或骨髓活检 预测化疗和α干扰素疗效 ABL突变 酪氨酸激酶区点突变 髓细胞白血病 预测伊马替尼（格列卫）疗效 2mL抗凝血或骨髓活检 Her-2/CEP17 FISH 乳腺癌、胃癌 乳头状癌诊断 石蜡白片 预测曲妥珠单抗（赫赛汀）疗效 VEGF/β-actin VEGFR/β-actin mRNA表达量 肠癌、肺癌、胃癌、乳腺癌、肾癌 预测贝伐单抗（阿瓦斯丁）疗效 石蜡白片+2mL抗凝血 肿瘤个体化治疗基因检测项目 检测项目 涉及肿瘤 预测内容 样本类型 ERCC1/β-actin mRNA表达量 肺癌、胃癌、肠癌、卵巢癌、宫颈癌、乳腺癌、胰腺癌、胆囊癌 预测铂类疗效 石蜡白片+2mL抗凝血 预测铂类疗效 BRCA1 /β-actin mRNA表达量 紫杉醇类和长春碱类药物疗效 RRM1/β-actin mRNA表达量 肺癌、胰腺癌、胆管癌 预测吉西他滨疗效 石蜡白片+2mL抗凝血 TS/β-actin mRNA表达量 胃癌、肠癌、肺癌、乳腺癌、 预测氟尿嘧啶类药物疗效 石蜡白片+2mL抗凝血 肺癌 预测培美曲塞疗效 肿瘤个体化治疗基因检测项目 检测项目 涉及肿瘤 预测内容 样本类型 TOP-ⅡA/CEP17 FISH/mRNA表达量 乳腺癌 预测蒽环类药物疗效 石蜡白片+2mL抗凝血 预测蒽环类药物毒性 UGT1A1 启动子区多态性 肠癌、肺癌、胃癌、乳腺癌 预测伊立替康毒性 石蜡白片前处理 1.烤片（90-95℃，0.5小时） 2.脱蜡（过夜，最后一缸换新二甲苯） 3.HE染色 4.镜下区分选择肿瘤组织 4.刮片 5.消化肿瘤组织（200μlTL+20μlOB酶，55℃2-3h消化时间视具体情况定） 第三章 基因检测前处理 HE染色结果 DNA的提取 1.血DNA的提取 2.石蜡组织DNA的提取 血液DNA提取 250μl抗凝血加入250μl Buffer BL和25μl OB酶，70℃孵育15分钟。 加入260μl无水乙醇震荡混合约20秒。 取上清转入收集柱中，12000rpm离心2分钟。 将收集柱置一新收集管上，加入500μl HB solution，12000rpm离心2分钟。 加入700μl wash Buffer，12000rpm离心2分钟。 空甩离心，12000rpm2分钟。 将收集柱置一新1.5ml离心管上，加入50μl 70℃预热的洗脱液，静置5分钟，12000rpm离心4分钟洗脱，即为DNA模板。 琼脂糖电泳检测提取DNA质量（或用分光光度计定量并记录）。 Omega Blood DNA kit protocol 石蜡DNA提取 在消化充分的组织中加入220μl BUffer BL，震荡混合，于70℃孵育。 加入220μl无水乙醇震荡混合约20秒。 取上清转入收集柱中，12000rpm离心2分钟。 将收集柱置一新收集管上，加入500μl HB solution，12000rpm离心2分钟。 加入700μl wash Buffer，12000rpm离心2分钟。 空甩离心，12000rpm2分钟。 将收集柱置一新1.5ml离心管上，加入50μl