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Western blot 实验技术（免疫印迹实验）;【基本原理】;Western Blot基本原理;Western Blot一般流程;【器材】;凝胶浓度与蛋白分离范围;制胶;4%浓缩胶（7.5ml） 双蒸水 4.55ml 30% Arc/Bis 1ml 分离胶缓冲液 (pH6.8) 1.9ml 10% SDS 75ul 10%AP 75ul TEMED 7.5ul 灌胶，插梳子，待凝，约0.5小时;准备样本 加2×Loading Buffer,混匀，煮沸3～5分钟， 10000g离心10分钟 取上清适量上样 电泳：5mA/胶 大约需时2小时;;;;转膜;转膜;转膜后检测;封闭;一抗、二抗孵育;二抗与底物反应显色;1 2 3 4 M Mr 1 2 3 4;Western Blot常见问题分析;SDS电泳凝胶中各主要成分的作用？ ;SDS电泳;条带比正常的窄？ “微笑”或“倒微笑”条带？;;转膜及抗体检测;背景太高