天津大学生物化学06第六章课件《酶学》.ppt

第七节 酶的分离提纯及活力测定 一、酶的分离提纯 二、活力测定 一、酶的分离提纯(总) 1．目的 2．提纯 3．制备战略 1．目的 （1）研究酶的理化特性、鉴定酶 （2）生物试剂及用作药物（高纯度） 2．提纯 酶有两大类，胞外酶及胞内酶。 胞外酶易分离。如收集动物胰液即可分离出其中的各种蛋白酶及脂酶。 胞内酶存在于细胞内，必须破碎细胞才能进行分离。 3．制备战略(总) （1）选材 （2）破碎细胞 （3）抽提 （4）浓缩 （5）纯化 3．制备战略1 （1）选材：含量高，易于分离。 （2）破碎细胞：研磨，匀浆器，捣碎机。 （3）抽提：抽提时注意的因素：pH、温度、盐及蛋白酶等。一般在低温下，调节pH至等电点，用盐析（硫酸铵或氯化钠）或有机溶剂（乙醇、丙酮、异丙醇等）使酶沉淀。 酶是生物活性物质，一般在0—50C进行提纯。乙醇、丙酮等有机溶剂分级分离时必须在－150C—－200C进行，酶制品一般都应在－200C以下低温保存。 3．制备战略2 ： （4）浓缩：抽提液和发酵液中酶浓度一般都很低，所以，在纯化前要进行浓缩，常用的方法有： ①蒸发：高真空的条件下，大面积热空气接触，使水分在瞬时蒸发，而达到目的。由于水分蒸发时能带走热量，所以，只要真空条件好，受热并不强。 ②超过滤。 ③凝胶过滤。 ④冰冻浓缩。 ⑤其他：如聚乙二醇浓