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微生物知识讲座 cerevisiae@163.com 一、 微生物 1.1 微生物基础知识 1.2 微生物的营养和培养基 1.3 微生物的代谢 二 、GMP相关微生物知识 2.1 什么是GMP 2.2 GMP对无菌操作方面的要求 三、ICHQ7A相关微生物知识 3.1 什么是ICHQ7A 3.2 ICHQ7A对无菌操作方面的要求 一、 微生物基础知识 微生物是一切肉眼看不见或看不清楚的微小生物的总称。它们都是一些个体微小（一般0.1mm）、构造简单的低等生物，包括属于原核类的细菌、放线菌、蓝细菌、支原体、立克次氏体和衣原体；属于真核类的真菌、原生动物和显微藻类；以及属于非细胞类的病毒和亚病毒。 微生物的分类 原核生物：细菌(狭义的)、放线菌、蓝细菌、支原体、立克次氏体和衣原体。 真核生物：真菌、显微藻类和原生动物等。 非细胞微生物：病毒和亚病毒。 原核生物 细菌：细菌(bacteria)是一类细胞细短（直径约0.5um，长约0.5um~5um），结构简单、胞壁坚韧、多以二分裂方式繁殖和水生性较强的原核生物。 放线菌：放线菌(actinomycetes)是一类主要呈菌丝状生长和以孢子繁殖的陆生性较强的原核生物。 放线菌 放线菌与人类关系极其密切，绝大多数属有益菌。至今已报道过的近万种抗生素中，约70％由放线菌产生；本厂生产土霉素的龟裂链霉菌、生产新霉素的弗氏链霉菌、生产阿维菌素的除虫链霉菌（也称阿维链霉菌）都是放线菌的代谢产物。 微生物的染色 为什么要染色 由于细菌细胞既微小又透明，故一般先要经过染色才能作显微镜观察。 染色分类 以被染色菌染色后的状态可以分为死菌染色和活菌染色。 单染 用一种染色剂的称单染，仅能对细菌形态观察。 复染-革兰氏染色 细菌先经碱性染料结晶染色，而经碘液媒染后，用酒精脱色，在一定条件下有的细菌此色不被脱去，有的可被脱去，因此可把细菌分为两大类，前者叫做革兰氏阳性菌（G+），后者为革兰氏阴性菌（G-）。为观察方便，脱色后再用一种红色染料如碱性蕃红等进行复染。阳性菌仍带紫色，阴性菌则被染上红色。 1.2微生物的营养和培养基 1.2.1、微生物细胞的化学组成 1.2.2、六大营养要素及其生理功能 1.2.3、培养基及其组成 1.2.1微生物细胞的化学组成 微生物细胞的化学成分（干物质）以有机物和无机物两种状态存在。有机物包含各种大分子，它们是蛋白质、核酸、类脂和糖类，占细胞干重的99%。无机成分包括小分子无机物和各种离子，占细胞干重的1%。水也是微生物细胞的重要组成成分，通常微生物细胞70%是水。 几种微生物的元素组成（干重 %） 1.2.2 微生物的六大营养要素 碳源 氮源 无机盐 能源 生长因子 水 （一）、碳源（Carbon source ） ◆定义：能提供微生物营养所需碳元素的营养物质称为碳源。 ◆功能：提供合成细胞物质及代谢物的原料;并为异养微生物生理活动提供所需要能源。 ◆种类: 无机含碳化合物（无机碳源）：如CO2和碳酸盐等。 有机含碳化合物（有机碳源）：糖与糖的衍生物、脂类、醇类、有机酸、烃类、芳香族化合物以及各种含碳的化合物。 微生物在元素水平上的最适碳源是：C·H·O型。 糖类＞有机酸类＞醇类＞脂类 单糖＞双糖＞多糖 己糖＞戊糖 葡萄糖、果糖＞甘露糖、半乳糖； 纯多糖＞杂多糖； 淀粉＞纤维素。 微生物工业发酵中用做碳源的原料 传统种类：糖类（糖蜜等）、淀粉（玉米粉、山芋粉、籼米粉、野生植物淀粉等）、麸皮、米糠等。 注：糖蜜中主要的糖类物质为蔗糖，蔗糖为非还原糖。 淀粉酶 配料中淀粉必须经常淀粉酶水解方可使用。 土霉素生产中所使用的淀粉酶为7658淀粉酶，这是一种α淀粉酶，其主要作用于葡萄糖单位的1、4糖苷键。 淀粉酶加量并非越多越好，过量使用会使料液中还原糖高，从而光长菌丝不长单位。 还原糖和非还原糖 能够还原斐林(H.von Fehling)试剂的糖称为还原糖，所有的单糖，不论醛糖、酮糖都是还原糖。大部分双糖也是还原糖，蔗糖例外。 葡萄糖效应 速效碳源与迟效碳源 葡萄糖是速效碳源，加入培养基后，菌体迅速利用。淀粉等是迟效碳源，需要等葡萄糖消耗到一定浓度以下才开始利用。淀粉的利用方式是通过分泌到胞外的淀粉酶将淀粉水解成小分子的葡萄糖以后，才可以利用。速效碳源有利于菌体生长，迟效碳源有利于产物生成。