chapter2-3光谱检测在生命科学中的应用.ppt

* * 式中： X1—样品中甲醇的含量，g/100mL； A1__测定样品中甲醇的含量，mg； V1—样品体积，mL。 * * 3 白酒中杂醇油含量的检测 物理性质：无色至黄色油状液体。有特殊臭味和毒性。相对密度0.811～0.832(20/20℃)。主要含有异戊醇、丁醇、丙醇和庚醇等。 * 二战期间，美国政府希望士兵得到较好的营养。但是当时，不知道食品中到底有什么维生素，有多少。在当时需要一个即便宜有快的方法。1941年，第一台commercial available 的分光光度计问世。 Beckman DU Spectrophotometer.使得维生素的测定变得非常简单。假设这表示样品，I0为照射到样品上的一定波长的光强度（称为入射光强度），It为光通过样品之后的光强度。通过测量光强度的减弱来得出物质量，这种方法被称为分光光度法。那么，物质为何对光有选择性的吸收？光强度的减弱如何与物质的浓度联系起来？怎样测量光的减弱？ * 紫外-可见分光光度计: 光源 样品池 单色器 检测器 数据处理 仪器控制 荧光(磷光)分光光度计: 光源 样品池 激发 单色器 检测器 数据处理 仪器控制 发射 单色器 二 荧光分光光度计构造 * 1. 光源的要求： 发射强度足够且稳定的连续光谱 光辐射强度随波长的变化小 有足够长的使用寿命 2.氙灯光源 常用气体放电灯类型： 氙灯光源 高压汞光源 波长范围：200~1000nm 工作压力：5~20 atm 启动电压：20~40KV 使用寿命：1000~2000h 最广泛应用的连续光源： 发射波长范围宽 发射光强度大 3. 高压汞灯光源 应用广泛的线光源： 253.7 296.5 302.2 312.6 313.2 365.0 365.5 366.3 404.7 435.8 546.1 557.0 579.0 (nm ) * 三. 单色器 四. 检测器 光电倍增管 放大倍数：2n~5n;n=10,103~107， 最大108~109 五.样品池：液池、固体槽 激发单色器、发射单色器 日立荧光光谱仪F-4600日立荧光分光光度计以其高灵敏度、快速的波长扫描，实用的预扫描功能，独特的光栅和水平狭缝光路设计而著称于世。适用于高灵敏度的荧光痕量分析，应用于材料，生命科学等高科技领域，和质控，教学等常规分析领域 ,测试发光材料的激发和发射光谱。 F-4600荧光光谱仪 * * * 应用 * * * * * * * 一、比色分析 比色法：以生成有色化合物的显色反应为基础，通过比较或测量有色物质溶液颜色深度来确定待测组分含量的方法，比色法为一种定量分析的方法。 应用实例 二、分光光度分析 * * 1 啤酒色度的测定 啤酒色度是指啤酒颜色的深浅，是啤酒常规化验项目之一啤酒色度的高低，主要取决于制麦工艺，但与糖化、发酵等其他工艺也有关。 * * 啤酒色度的测定方法是以碘液做标准，取100毫升水，向其中滴加0.1N碘液，滴定至于啤酒颜色一致，所消耗碘液毫升数，即为啤酒色度。 方法一、 * * 操作步骤 试剂 0.1N的碘液、超纯水 * * 实验结果 色度（0.1N碘液毫升数/100毫升） = 消耗碘液毫升数X（碘液实际当量浓度/0.1） * * 方法二 1．原理 将除气后的啤酒注入 EBC 比色计的比色皿中，与标准 EBC 色盘比较，目视读数或自动 数字显示出啤酒的色度，以 EBC 色度单位表示。 EBC——欧洲啤酒协会，简称“欧啤协。” Europe Beer consortium * * 2．仪器 EBC 比色计(或使用同等分析效果的仪器)：具有 2.O～27.0 EBC 单位的目视色度盘或自 动数据处理与显示装置。 * * 一般淡色啤酒的色度在 5.0～14.0 EBC 范围内；浓色啤酒的色度在 15.0～40.0 EBC 范围内。 测定浓色或黑色啤酒时，需要将啤酒稀释至合适的色度范围(即2.0～27.0 EBC 范围内)，然后将实验结果乘以稀释倍数。 * * 2 白酒中甲醇含量的检测 甲醇对人体的毒性较大，4-10g即可引起严重中毒，尤其是甲醇的氧化物甲酸和甲醛。急性中毒，头痛、恶心、视力模糊等，呼吸中枢麻痹，昏迷甚至死亡。慢性中毒表现为粘膜刺激症状，昏睡、头痛、消化障碍、视力模糊、耳鸣等，以致双目失明。 * * 甲醇的检测原理 酒中甲醇在磷酸溶液中被高锰酸钾氧化为甲醛，过量的高锰酸钾及在反应中产生二氧化锰用硫酸草酸溶液除去，甲醇与品红亚硫酸作用生成蓝紫色醌型色素，与标准系列比较定量。 * * 仪器