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Rac1在肝癌细胞株生长和侵袭中的意义 （作者:___________单位: ___________邮编: ___________） 【摘要】 目的： 证实Rac1在肝癌细胞的生长与侵袭中的意义，寻找可能的肿瘤基因治疗新靶点。方法： 特异性抑制Rac1蛋白表达的siRNA干扰肝癌高转移细胞株97H，观察肝癌高转移细胞株97H内Rac1表达、细胞生长、肿瘤细胞的活力和体外侵袭力的变化。结果： 肝癌高转移细胞株97H内Rac1表达、细胞生长受抑制，肿瘤细胞的活力和体外侵袭力显著降低。结论： Rac1表达的减少能够显著抑制肝癌细胞的生长和侵袭，可能成为肿瘤基因治疗新的靶点。 【关键词】 Rac1 肝癌高转移细胞株 siRNA 移 ［Abstract］ Objective: To prove Rac1 might play an important role in the proliferation and transference of hepatoma cell.Methods： small interference RNA technique was employed to knock down gene expression of Rac1 in hepatoma cell line 97H. Results： The protein level of Rac1, the cell proliferation, the cell vitality and the ability to invade the reconstituted basement membrane were decreased dramatically after transfection with a Rac1specific siRNA vector. Conclusion： Rac1 might play an important role in the development, progression,transference of hepatoma and also provide a possible strategy for the interference of tumor angiogenesis by targeting the Rac1. ［Key words］ Rac1; hepatoma cell; siRNA;transference 肝癌的基因治疗正在不断探索中,表达调控治疗是肝癌基因治疗的重要策略。在先前的研究中我们发现肝癌细胞株Rac1的表达显著高于正常肝细胞株，提示Rac1与肝癌的生长和转移有密切的关系［1］。本次研究我们运用RNA干扰技术，调控信号分子的表达，进一步证实Rac1与肝癌生长转移的关系，为肝癌的基因治疗寻找新的靶点。 1 材料与方法 1.1 材 料 肝癌高转移细胞株97H由复旦大学附属中山医院肝癌研究所分离和保存。LipofectamineTM 2000购自Invitrogen公司；兔抗人Rac1购自Santa Cruz公司；鼠抗人的βactin购自RD公司；HRP标记山羊抗鼠二抗，HRP标记山羊抗兔二抗购自Biochemicol公司；细胞裂解液、BCA蛋白浓度测定试剂盒购自上海申能博彩公司；PVDF膜购自华舜公司；Costar TranswellTM培养板（3422，孔径8μm，直径6.5 mm），购自Corning公司；Trigel Basement Membrane Matrix(356237, Phenol Redfree),购自BD公司；siRNA由上海化学基因公司合成。 1.2 研究方法 肝癌高转移细胞株97H用含10%小牛血清的DMEM培养液置于37℃，5%CO2的培养箱中培养。 1.2.1 siRNA合成 在基因库中查到人Rac1基因序列（编号是NM_198829），输入到RNAi设计软件中，得到4个siRNA片段序列，选择特异性最好的三种加上文献报道的针对大鼠Rac1的一段序列，序列如下： 1号siRNA：5′UGUCCGUGCAAAGUGGUAUtt3′ 5′AUACCACUUUGCACGGACAtt3′ 2号siRNA：5′UCCUAUCCGCAAACAGAUGtt3′ 5′CAUCUGUUUGCGGAUAGGAtt3′ 3号siRNA：5′CUUUGCAAAGACCUUCGUCtt3′ 5′GACGAAGGUCUUUGCAAAGtt3′ 4号siRNA：5′GUUCUUAAUUUGCUUUUCCtt3′ 5′GGAAAAGCAAAUUAAGAACtt3′ 上述siRNA由上海化