Rapamycin与cyclosporin A对同种排斥过程中TLR5及Foxp3表达的影响.docVIP

Rapamycin和cyclosporin A对同种排斥过程中TLR5及Foxp3表达的影响 （作者:___________单位: ___________邮编: ___________） 作者：陈富强, 曲莉莉, 张超, 梁婷, 宋静, 徐佳, 侯桂华 【摘要】 　　目的: 研究雷帕霉素（Rapamycin, RAPA）和环孢素A（cyclosporin A, CsA）体内处理对同种移植小鼠急性排斥过程中TLR5及Foxp3表达的影响。方法: 建立同种皮肤移植模型, 术后给予RAPA或CsA, 1次/d, 连续14 d, 同时设生理盐水对照组。每日观察移植物存活状况。术后选取1、 7、 10、 14、 21 d共5个时间点, 提取受体小鼠脾细胞, RTPCR检测TLR5及Foxp3 mRNA表达, 探讨不同处理组基因表达与移植物生存的相关性。体外实验利用鞭毛蛋白（flagellin）联合RAPA和CsA处理正常小鼠T细胞6 h, RTPCR检测TLR5表达。结果: RAPA和CsA可明显延长小鼠同种移植皮片存活期。RAPA可促进脾细胞TLR5 mRNA表达升高, 停药后的第21天仍明显高于CsA组和对照组（P＜0.05）; CsA组在第7、 10天有显著升高, 第21天降低（P＜0.05）; 3组中最高表达的时间点为移植后第10天, 此时正值排斥高峰期。RAPA可引起Foxp3 mRNA的表达升高（P＜0.05）, 停药后仍维持较高水平; CsA组仅在移植后第7、 10天短暂升高, 第14天低于对照组（P＜0.05）。移植后1、 7、 10、 21 d 3组的TLR5与Foxp3 mRNA变化趋势正相关。体外实验中, RAPA或CsA与flagellin联合使用, 可促进TLR5的表达, 以前者的作用更为明显。结论: RAPA和CsA在同种移植急性排斥高峰期可引起TLR5和Foxp3表达的协同升高, 且RAPA的作用更加明显和持久, 鞭毛蛋白体外可以增强这种作用效果。 【关键词】 雷帕霉素; 环孢素A; 同种移植; TLR5; Foxp3; 鞭毛蛋白 　　CD4+CD25+调节性T细胞（Treg）在维持外周免疫耐受, 调控T细胞免疫应答, 预防移植排斥中起重要作用。转录因子Foxp3是Treg的特征性标志, 对其功能的诱导起关键作用。研究证实Treg高表达TLR4、 TLR5、 TLR7和TLR8, 其中TLR5活化能够增强Treg细胞抑制功能, 同时可使Foxp3表达增加, TLR5的特异配体鞭毛蛋白可增强Treg对效应性T细胞的抑制作用。但是同种移植状态下, TLR5的表达状况及移植物生存关系的研究鲜见报道。研究移植排斥过程中TLRs对Treg细胞的调节机制, 对探讨Treg的免疫抑制机制以及信号转导通路具有重要的意义。 　　免疫抑制药物雷帕霉素 (Rapamycin, RAPA)和环胞素A(cyclosporin A, CsA)广泛用于器官移植后抗移植物排斥反应, 并且在实验模型中作为诱导免疫耐受的工具。目前使用的免疫抑制药物可以通过抑制效应性T细胞的扩增防止移植物的排斥, 但是是否可以诱导激活Treg细胞以及其分子机制仍需要进一步阐明。CsA抑制TCR介导的T细胞激活和IL2的产生, 而RAPA阻断T细胞生长因子细胞内信号转导, 因此 CsA和RAPA对CD4+CD25+Treg可能有不同的作用［1］。研究表明RAPA在体外可以选择性地扩增CD4+CD25+调节性T细胞, 而不阻断其他类型T细胞的扩增和活化, 诱导细胞凋亡［2］。 　　我们前期的研究证实RAPA和CsA体内处理可以明显增加同种移植受体的Treg比例, 增强Foxp3的表达。但是即使体内使用RAPA, 同种移植个体中的Treg比例仍然处于较低水平［3］。如何通过调节Treg细胞活性, 在体内扩增Treg细胞, 更好地诱导同种移植耐受仍是亟待解决的问题。2008年有研究报告［4］, 体内给予TLR5特异配体flagellin, 可以保护机体免受化学、 病毒和辐射等损害。鉴于TLR5的表达有助于免疫保护的形成, 我们推测同种移植个体的TLR5的活化可能有助于Treg的激活和移植耐受的形成。因此利用RAPA和CsA处理小鼠同种移植模型, 研究急性排斥过程中体内TLR5及Foxp3表达量的动态变化趋势, 探讨在急性同种移植排斥过程中TLR5和Foxp3表达与移植物生存的关系及两种抗排斥药物的作用, 旨在为利用TLR5特异配体和RAPA进行同种移植耐受诱导奠定基础。 　　1 材料和方法 　　1.1 材料 BALB/c小鼠(H2d), 由山东大学实验动物中心提供; C57BL/6 (H2b, B