SU11248干预白血病细胞HL60对P27KIP1与cyclin G蛋白表达的影响.docVIP

SU11248干预白血病细胞HL60对P27KIP1和cyclin G蛋白表达的影响 （作者:___________单位: ___________邮编: ___________） 作者：林东红, 韩燕燕, 陈惠瑜, 罗玲清, 胡建达 【摘要】 目的: 探讨SU11248对人髓系白血病细胞株HL60的效应及其对HL60细胞表达P27KIP1和cyclin G蛋白改变的影响。方法: 应用MTT法检测SU11248对HL60细胞增殖能力的影响; 采用Western blot检测SU11248干预HL60细胞前后P27KIP1和cyclinG蛋白表达水平的变化及其相关性。结果: 不同浓度（0.5、 1.0、 2.0、 4.0、 8.0 mg/L）SU11248作用HL60细胞24 h、 48 h、 72 h、 96 h后, SU11248可抑制HL60细胞增殖, 抑制作用呈现剂量和时间依赖性, 半数抑制浓度（IC50）约为2.0 mg/L。2.0 mg/L SU11248作用HL60细胞72 h时抑制率达到最高。2.0 mg/L SU11248作用HL60细胞后cyclinG蛋白表达呈时间依赖性降低, 而P27KIP1蛋白表达呈时间依赖性升高。两蛋白各时间组的改变与对照组相比差异均有统计学意义（P0.05）。结论: SU11248具有抑制HL60细胞增殖的生物效应, 在HL60细胞及SU11248干预HL60细胞过程中, P27KIP1 基因可能对cyclinG基因及细胞周期发挥负性调控作用。SU11248通过上P27KIP1、 下调cyclin G而干扰细胞周期可能是其发挥抑制肿瘤细胞分裂的环节之一。 【关键词】 SU11248; HL60细胞; P27KIP1; cyclinG 造血细胞周期调控异常是白血病发生过程中最重要的事件之一。参与细胞周期调控的因子主要有细胞周期蛋白（cyclins）、 细胞周期蛋白依赖性激酶（cyclindependent kinases, CDK）、 细胞周期蛋白依赖性激酶抑制因子（cyclindependent kinases inhibitor, CKI）。在多种cyclin中, cyclinG在细胞周期家族中发现较晚, 其功能可能为在细胞周期调控和DNA修复中起作用, 并参与细胞凋亡过程。有资料报道［1］, 在某些肿瘤中, cyclinG的过表达有促进细胞周期的作用, 可促进细胞增殖及癌细胞生长过程, 在肿瘤的生物靶向治疗方面有很好的应用前景。有研究初步发现cyclin G与急性淋巴细胞白血病、 慢性粒细胞白血病等恶性血液病有关［2］。 CKI的Kip家族包括p21、 p27、 p57。其中P27KIP1为新近发现的广谱的CKI, 能抑制大多数cyclinCDK的磷酸化激酶活性, 是细胞转录的负性调控因素, 在实验性肿瘤的发生发展过程中被证实是一种抑制癌基因［3］。其低表达或不表达与白血病患者病情进展及预后相关［4］。在白血病的研究中, 发现某些cyclin的表达与CKI的表达之间存在着正反馈机制［5］, P27KIP1为广谱的CKI, 其与cyclin G 之间也可能存在互调控关系。 苹果酸舒尼替尼(sunitinib malate, Sutent, SU 11248)是一种新的多靶点酪氨酸激酶抑制剂, 具有抗肿瘤和抗血管生成的双重作用。2006年1月FDA批准本品用于甲磺酸伊马替尼(imatinib mesylate, GGleevec)治疗失败或不能耐受的胃肠道间质瘤患者以及晚期肾细胞癌患者［6, 7］, 对其他实体瘤的治疗应用也已进入II期临床阶段, 但其与恶性血液病关系的研究尚不多。因此, 我们拟以人髓系白血病细胞株HL 60为白血病模型, 探讨白血病细胞HL60 P27KIP1与cyclin G蛋白的表达及SU11248干预对蛋白表达的影响, 为白血病的生物靶向治疗提供新途径。 1 材料和方法 1.1 材料 SU11248 购自biocompound公司。用二甲亚砜溶解, -20℃避光保存备用。人髓系白血病细胞株HL60由福建省血液病研究所传代保存。RPMI1640培养液为Gibco公司产品; 二甲亚砜、 MTT溶液为Sigma公司产品; Protein Extraction Reagent 为Pierce公司产品; P27KIP1多克隆抗体（兔抗人）为eBioscience公司产品; cyclin G1多克隆抗体（兔抗人）为LAB VISION公司产品; βactin单克隆抗体（大鼠抗人）、 Western blot Luminol Reagent为Santa Cruz公司产品; βactin蛋白、 辣根过氧化物