王豪老师1 乙肝病毒耐药变异的检测课件.pptVIP

乙肝病毒耐药变异的检测 及临床意义 北京大学人民医院肝病科 王 豪 主要内容 乙肝病毒的活跃复制与乙肝肝硬化和肝癌密切相关； 抗病毒治疗是控制乙肝的有效治疗 核苷类药物的主要临床效果与耐药发生 病毒耐药的主要检测方法 病毒耐药的临床意义与防治对策 慢性乙肝的抗病毒治疗 对于慢性乙肝，抗病毒治疗已成为最主要和最有效的治疗； 国内外的慢性乙肝防治指南均推荐实行抗病毒治疗。 抗乙肝病毒治疗药物 核苷(酸)类药物的分类 乙肝病毒的耐药现象 核苷类药物的耐药机制 在应用核苷类药物后，敏感的野生株受到 药物的强烈抑制，逐渐减少消失，而自发 出现的耐药变异株不受药物抑制，逐渐增 多成为优势株。 因此核苷类药物对耐药株病毒起到了选择 作用，而不是诱导突变的作用。 核苷(酸)类药物治疗后 病毒耐药的检测 DNA序列分析法 直接序列分析的优缺点 限制性片段长度多态性分析法Restriction Fragment Length Polymorphism 线性探针反向杂交法(INNO-LIPA HBV DR v1.2.3) INNO-LIPA HBV DR 线性探针反向杂交法优缺点 基因芯片法 病毒耐药变异检测的临床意义 乙肝病毒耐药位点 与耐药相关的病毒变异 拉米夫定耐药的处理 替比夫定耐药的处理 阿德福韦酯耐药的处理 恩替卡韦耐药处理 核苷类药物耐药的处理 第一代产品：检测LAM变异的180和204位点； 第二代产品：180+204+80+173 （LAM） 181+236 （ADV） 第三代产品：两个检测条，第一条是v.2，第二 个条是检测ETV变异和TDV变异， 并加入了ADV原发无应答的变异； 针对不同的药物， 不同的变异位点， 不同的变异方式， 不同的基因型。 共包被有54条探针， 检出11个位点变异 1 2 3，4 5 6 7 8 9 10 11 灵敏度高，可检出5%的变异株； 商品化试剂，操作方便快捷，结果稳定准确； 只能检出已知位点； 发现新位点后必须增加新探针； 因为病毒有多种基因型，一个位点的突变， 可能需要多个探针。最终为了检出所有突 变，需要大量不同的探针； 6. 商品试剂盒价格昂贵。 同线性探针反向杂交方法类似。 基因芯片又称基因微矩阵(microarray)，它 是将大量特定的基因片段(寡核苷酸片段)作为 探针有序地、高密度地排列在固定载体上，然 后与待测标本进行杂交，最后显色，阅读结果。 基因芯片检测模式 单万水 等 全国第2届中西医结合传染病学术会议论文汇编，2008 治疗开始前的耐药病毒检测可以帮助 选择初治药物； 2. 治疗后的耐药监测有助于及时采取挽 救治疗措施； 3. 根据耐药变异位点的不同选择合适的 药物； 拉米夫定：L80I V173L L180M M204I M204V 恩替卡韦：V173L L180M A184G S202I M204I M204V M250V 替比夫定 M204I 阿德福韦：A181V N236T 替诺福韦：A194T FTC： M204I M204V 阿德福韦原发耐药： I233V LAM ETV LdT FTC ADV TDV L80I V173L L180M A181V A184G A194T S202I M204I M204V N236T M250V I233V I233V: ADV原发无应答 注： 核苷(酸)类药物耐药后挽救治疗方案 药物耐药 挽救治疗方案 拉米夫定耐药 加阿德福韦 换恩替卡韦(有恩替卡韦耐药风险) 加替诺福韦或换Truvada (TDF + FTC) 阿德福韦耐药 加拉米夫定 换/加用恩替卡韦 (如果事先没有拉米夫定耐药) 换用Truvada 替比夫定耐药 加阿德福韦或者替诺福韦 换用恩替卡韦(有恩替卡韦耐药风险) 加替诺福韦或换Truvada 恩替卡韦耐药 加/换用阿德福韦或替诺福韦 换用 Truvada Lok ASF McMahon BJ. AASLD Practice Guideline 2009 Hepatology 2009 优先选择： 拉米夫定+阿德福韦酯联合治疗 次选 1. ： 恩替卡韦1mg (倍量) 次选