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第4讲 动物细胞工程 点击考点： 1.动物的细胞培养与体细胞核移植 2.细胞融合与单克隆抗体 考点1. 动物细胞培养 1. 概念： 从动物机体中取出相关的 ，将它分散成单个 ，然后放在适宜的 上，让这些细胞 。 组织 细胞 培养基 生长和增殖 2. 原理： 细胞增殖 动物组织 分散成单个细胞 细胞悬液 3. 过程： 原代培养 传代培养 原代培养 传代培养 问题探讨： 动物胚胎或出生不久的幼龄动物的器官或组织 ①选择动物组织材料需注意什么？ ②如何将动物组织处理成细胞悬浮液？ 剪碎和胰蛋白酶处理 ③动物培养需要哪些培养条件？ （1）无菌、无毒的环境。培养液及培养器具均要灭菌，培养液中添加抗生素、及时更换培养液清除代谢产物。 （2）适宜的温度和pH。 （3）气体环境：95%空气+5%CO2 （4）营养：合成培养基 ④合成培养基有哪些成分？ 葡萄糖、氨基酸、促生长因子、无机盐、微量元素等、动物血清。 ⑤什么是原代培养？ 动物组织消化后的初次培养称为原代培养。 ⑥动物细胞可否一直进行原代培养？为什么？ 不能。悬液中的细胞会贴壁生长，当贴壁细胞生长到表面相互接触时，细胞就会停止分裂，称为接触抑制。 ⑦细胞培养出现接触抑制时，应该怎么办？ 贴满瓶壁的细胞需重新用胰蛋白酶等处理，然后分瓶继续培养，该过程称为传代培养。 ⑧什么是细胞株、细胞系？分别有什么特点？ 传代培养10—50代的细胞称为细胞株。 传代培养50代以后的细胞称为细胞系。 细胞株特点：部分细胞核型发生改变。 细胞系特点：细胞发生突变，朝向癌细胞发展。 4. 动物细胞培养结果： 获得大量细胞，不能得到生物个体。 5. 动物细胞培养应用： （1）大规模生产有重要价值的生物制品 （5）培养健康的皮肤细胞为大面积烧伤病人移植 （4）培养正常和病变细胞，用于生理、病理、药理等方面的研究 （3）用于检测有关物质毒性，判断某种物质的毒性 （2）基因工程受体细胞离不开动物细胞培养 导航P201—例1 考点2. 动物体细胞核移植和克隆动物 1. 概念： 动物核移植是将动物的一个细胞的 ，移入一个已经 的卵母细胞中，使其 并发育成一个新的 ，这个新的胚胎最终发育为 。 细胞核 去掉细胞核 重组 胚胎 动物个体 用 的方法得到的动物称为克隆动物。 核移植 2. 类型 胚胎细胞核移植 体细胞核移植 3. 原理： 动物细胞核的全能性 4. 过程： 卵母细胞体外培养至MII中期 高产奶牛（供体） 体细胞培养 细胞质 重组胚胎 卵裂 代孕母牛子宫 胚胎移植 与供体遗传物质基本相同的犊牛 分娩 妊娠 电刺激使细胞融合,并激活受体细胞 去核与 第一极体 显微注射 问题探讨： 一般选优良动物的传代10代以内的细胞 ①选择供体细胞需注意什么？ ②选择受体细胞有什么要求？ 去核的MⅡ期卵母细胞 完成课本P49讨论和导航P202—例3 5. 体细胞核移植技术的应用前景： 见课本P49—50 考点3. 动物细胞融合 1. 概念： 动物细胞融合也称 ，是指 动物细胞结合形成 的过程。 细胞杂交 两个或多个 一个细胞 融合后形成具有原来两个或多个细胞 的单核细胞，称为 。 遗传信息 杂交细胞 2. 原理： 细胞膜的流动性、细胞增殖 3. 方法： 物理法：电激、离心、振动 化学法：聚乙二醇（PEG） 生物法：灭活的病毒 4. 应用： 制备单克隆抗体 5. 单克隆抗体制备过程： 免疫 融合 筛选1 筛选2 增殖 问题探讨： 注射特定抗原蛋白 ①在获取抗体前，应对小鼠做什么处理？ ②筛选培养基筛选出了哪些细胞？ 只有肿瘤细胞和正常细胞融合，才能存活 ③第二次筛选步骤筛选出了哪些细胞？ 只有分泌出特异抗体的细胞才能被选择 ④杂交瘤细胞增殖方式有哪几种？ 体外条件大量培养和注射到小鼠腹腔增殖 6. 单克隆抗体的应用： （1）临床诊断 （2）作为载体，运载抗癌药物，形成“生物导弹”治疗肿瘤 7. 单克隆抗体的优点： 与常规抗体相比，单克隆抗体产量高，特异性强，灵敏度高，优越性十分明显。 导航P201—例2