微生物染色法 培养基与试剂 1.doc

微生物染色法 培养基和试剂 1        1　主题内容与适用范围 　　本标准规定了各种染色法、培养基和试剂。 　　本标准适用于食品和食物中毒样品中各类微生物的检验。 　　2　染色液配制及染色法 　　2.1　美蓝染色法 　　2.1.1　吕氏碱性美蓝染色液 　　美蓝　　　　　　　　　　　0.3g 　　95%乙醇　　　　　　　　　 30mL 　　0.01%氢氧化钾溶液　　　　100mL 　　将美蓝溶解于乙醇中，然后与氢氧化钾溶液混合。 　　2.1.2　染色法 　　将涂片在火焰上固定，待冷。滴加染液，染1～3min，水洗，待干，镜检。 　　2.1.3　结果 　　菌体呈蓝色。 　　2.2　革兰氏染色法 　　2.2.1　结晶紫染色液 　　结晶紫　　　　　　　　1g 　　95%乙醇　　　　　　　 20mL 　　1%草酸铵水溶液　　　　80mL 　　将结晶紫溶解于乙醇中，然后与草酸铵溶液混合。 　　2.2.2　革兰氏碘液 　　碘　　　　　　　　　　1g 　　碘化钾　　　　　　　　2g 　　蒸馏水　　　　　　　　300mL 　　将碘与碘化钾先进行混合，加入蒸馏水少许，充分振摇，待完全溶解后，再加蒸馏水至300mL。 　　2.2.3　沙黄复染液 　　沙黄　　　　　　　　　 0.25g 　　95%乙醇　　　　　　　　10mL 　　蒸馏水　　　　　　　　 90mL 　　将沙黄溶解于乙醇中，然后用蒸馏水稀释。 　　2.2.4　染色法 　　2.2.4.1　将涂片在火焰上固定，滴加结晶紫染色液，染1min，水洗。 　　2.2.4.2　滴加革兰氏碘液，作用1min，水洗。 　　2.2.4.3　滴加95%乙醇脱色，约30s；或将乙醇滴满整个涂片，立即倾去，再用乙醇滴满整个涂片，脱色10s。 　　2.2.4.4　水洗，滴加复染液，复染1min。水洗，待干，镜检。 　　2.2.5　结果 　　革兰氏阳性菌呈紫色。革兰氏阴性菌呈红色。 　　注：亦可用1：10稀释石炭酸复红染色液作复染液，复染时间仅需10s。 　　2.3　耐酸性染色法(萎－倪二氏法) 　　2.3.1　石炭酸品红染色液 　　碱性品红　　　　　　 0.3g 　　95%乙醇　　　　　　　10mL 　　5%酚水溶液　　　　　 90mL 　　将品红溶解于乙醇中，然后与酚溶液混合。 　　2.3.2　3%盐酸－乙醇 　　浓盐酸　　　　　　　 3mL 　　95%乙醇　　　　　　　97mL 　　2.3.3　复染液 　　吕氏碱性美蓝染色液。 　　2.3.4　染色法 　　2.3.4.1　将涂片在火焰上加热固定，滴加石炭酸品红染色液，徐徐加热至有蒸气出现，但切不可使沸腾。染液如因蒸发减少时，应随时添加。染5min，倾去染液，水洗。 　　2.3.4.2　滴加盐酸－乙醇脱色，直至无红色脱落为止(所需时间视涂片厚薄而定，一般为1～3min)，水洗。 　　2.3.4.3　滴加吕氏碱性美蓝染色液，复染30s～1min，水洗，待干，镜检。 　　2.3.5　结果：耐酸性细菌呈红色，其他细菌、细胞等物质呈蓝色。 　　2.4　柯氏染色法 　　2.4.1　染色液 　　2.4.1.1　0.5%沙黄液。 　　2.4.1.2　0.5%孔雀绿液。 　　2.4.2　染色法 　　2.4.2.1　将涂片在火焰上固定，滴加0.5%沙黄液，并加热至出现气泡，约2～3min，水洗。 　　2.4.2.2　滴加0.5%孔雀绿液，复染40～50s。水洗，待干，镜检。 　　2.4.3　结果 　　布氏杆菌呈红色，其他细菌及细胞呈绿色。 　　2.5　奥尔特氏荚膜染色法 　　2.5.1　染色液 　　沙黄　　　　　　　　　　 3g 　　蒸馏水　　　　　　　　　 100mL 　　用乳钵研磨溶解。 　　2.5.2　染色法 　　将涂片在火焰上固定，滴加染色液，并加热至产生蒸气后，继续染3min。水洗，待干，镜检。 　　2.5.3　结果 　　炭疽芽胞杆菌菌体呈赤褐色，荚膜呈黄色。 　　2.6　瑞氏染色法 　　2.6.1　染色液 　　瑞氏色素　　　　　0.1g 　　甲醇　　　　　　　60mL 　　用乳钵研磨溶解。 　　2.6.2　染色法 　　2.6.2.1　涂片待自然干燥后，滴加染色液，固定1min。 　　2.6.2.2　加入等量蒸馏水(pH6.5)，染色3～5min。 　　2.6.2.3　用蒸馏水冲洗，待干，镜检。 　　2.7　鞭毛染色法 　　2.7.1　染色液的配制 　　2.7.1.1　甲液：称丹宁酸5g、氯化高铁(FeCl3)1.5g，溶于100mL蒸馏水中，待溶解后加入1%的氢氧化钠溶液1mL和15%的甲醛溶液2mL。 　　2.7.1.2　乙液：称2g硝酸银溶于100mL蒸馏水中。 　　在90mL乙液中滴加浓氢氧化铵溶液，到出现沉淀后，再滴加使其变为澄清，然后用其余10mL乙液