精品分子技术在肿瘤靶向药物治疗的应用_1课件.pptVIP

分子技术在肿瘤靶向药物治疗的应用; 肿瘤靶向治疗（Target therapy of cancer）;荧光原位杂交（ Fluorescence in situ hybridization，FISH ）技术;简介;用已知的标记单链核酸为探针，按照碱基互补的原则，与待检材料中未知的单链核酸进行异性结合，形成可被检测的杂交双链核酸。由于DNA分子在染色体上是沿着染色体纵轴呈线性排列，因而可以探针直接与染色体进行杂交从而将特定的基因在染色体上定位;FISH检测染色体易位（Translocation）在淋巴瘤分型中的应用;检测技术特点;FISH基因检测在淋巴瘤的应用;弥漫大B细胞淋巴瘤（DLBCL） 按免疫组化亚型分为 CD5阳性DLBCL 生发中心B细胞样变型(GCB)、 非生发中心B细胞样变型(non-GCB) 3类;◆ BCL6基因断裂---辅助诊断弥漫性大B细胞淋巴瘤;;Offit, K. N Engl J Med, 1994. 331(2): p. 74-80.;IGH/CCND1融合基因可见于95%的套细胞淋巴瘤，是套细胞淋巴瘤与其他淋巴瘤鉴别的重要指标。;l 正常细胞：两个红色信号，两个绿色信号。 l 异常细胞：一个红色信号，一个绿色信号，两个融合信号。;API2/MALT1基因检测试剂盒 ; API2/MALT1融合基因的检测可以指导抗HP治疗;l 正常细胞：两个红色信号，两个绿色信号。 l 异常细胞：一个红色信号，一个绿色信号，两个融合信号。;BCL2/IGH重排发生在约80%-85%的FL患者中，检测BCL2/IGH基因重排可以辅助诊断FL。 ;l 正常细胞：两个红色信号，两个绿色信号。 l 异常细胞：一个红色信号，一个绿色信号，两个融合信号。;结果判读-阳性结果;结果判读-阳性结果; 约80%的伯基特淋巴瘤病例发生t(8；14) （q24;q32）； 约15%的伯基特淋巴瘤病例发生t(2；8)(p11;q24)； 约5%发生t(8；22)（q24;q11）。 染色体易位导致C-MYC基因断裂重组可能是伯基特淋巴瘤的一个标志，可以应用于临床上伯基特淋巴瘤的辅助诊断。;;结果判读-阳性结果;FISH技术在乳腺癌靶向治疗应用;乳腺癌 Her-2基因;乳腺癌Her-2基因及蛋白检测 ;Her2基因检测流程;A. 无须计数的大簇团信号（高度扩增）;30%的肿瘤细胞全部的细胞膜高强度着色;免疫组化（－）与FISH扩增阳性;基因突变检测方法;1.RNA酶A切割(RnaseAcleavage) 2.变性梯度凝胶电泳(DGGE) 3. 杂合双链分析法(HA) 4. 化学切割错配(CCM) 5.碳化二亚胺检测(Carbodiimide,CDI) 6.酶促切割错配(Enzyme Mismatch Cleavage, EMC) 7.单链构象多态性 (Single-Strand Conformation) 8.切割片段长度多态性 9.DNA测序(Sequencing) 10.双脱氧指纹图谱法(Dideoxy Finger-printing, ddF) 11.错配接合蛋白检测 12.蛋白截短测试（protein truncation test） ;13.变性的高效液相色谱检测(Denaturing High Performance Liguld Chromatography DHPLC) 14.DNA芯片技术(DNAchip) 15.等位基因特异性扩增 16.等位基因特异性寡核苷酸片段分析(Allele-Specific Oligonucleotide,ASO) 17.引物延伸检测(Primer Extension,PEX) 18.寡核苷酸连接检测(Oligonucleotide Ligation Assay,OLA) 19.限制性片段分析(Restriction Fragment Analysis） 20.突变体富集PCR法（mutant-enriched PCR） 21.蝎形探针扩增阻滞突变系统（Scorpions amplification refractory mutation system）;肺癌组织EGFR基因扩增和突变检测及其临床意义;研究背景; FISH检测EGFR基因扩增 标本类型：石蜡包埋组织（手术、活检、穿刺） 冰冻组织 胸、腹水沉渣细胞 探针类型：GLP EGFR / CSP7 定量PCR检测EGFR基因突变分型 突变类型： 19 exon （2235