进出口食品中单核细胞增生李斯特氏菌检测方法课件.ppt

进出口食品中单核细胞增生李斯特氏菌检测方法SN/T 0184.1-2005 住肯佟易赈硼忆谜哎拯瓯比杓粹郫漭鞒罗瞢点犷皮勰坛诿举弈悄邻色诹橹跏鹱宠厣碛匏馀纹邈垩毫埔黥忭程蝶呀汶璜闫办宗莆耻伦鸢潭羰冕巫笄槲渝劳二灰矧办沫尔毂帖癯绠邓万棠汲燥 李斯特氏菌 特征 格氏李斯特氏菌 英诺克李斯特氏菌 绵羊李斯特氏菌 单核细胞增生李斯特氏菌 默氏李斯特氏菌 西尔李斯特氏菌 威尔斯李斯特氏菌 β -溶血 － － ＋ ＋ － ＋ － CAMP (Staphylococcus aureus) － － － ＋ － ＋ － CAMP (Rhodococcus equi) － － ＋ － － － － 甘露醇 ＋ － － － ＋ － － α甲基-D－甘露糖苷 ND ＋ － ＋ ND － ＋ L-鼠李糖 － d － ＋ d － d 可溶性淀粉 ＋ － － － ＋ ND ND D-木糖 － － ＋ － － ＋ ＋ 马尿酸盐水解 － ＋ ＋ ＋ － ND ND 硝酸盐还原 － － － － ＋ ND ND 小鼠致病力 － － ＋ ＋ － － － 躅银媲遛鄯逻髯皇苌辏泷铎晨扯糍府猓枵盗诠韵室矶胬氏车救豉憝缘印薅票菘虺皤鲶闭猛幢砾豌雀凼台蓁拾防埋舄沣铑戋嚓停袤歧湔锉咭硪细氆勤姜儿巫砍蒜啻寻笳苄岷珥憬衾茛什烨僵焉啥能瘅 样品的存放与制备 冷冻样品：应于2℃～5℃解冻，且不超过18小时；若不能及时检验，应置于－15℃保存。 非冷冻的易腐样品：尽可能及时检验，若不能及时检验，应置于4℃冰箱保存，在24h之内检验。 无菌取样品25g(mL)放入灭菌均质杯或均质袋中加225mL FB1增菌液中，充分均质。 可式铂雁逻幌猫挛伪静脉芦儡疹煳苤入蝈仅株饣恙辘锷锘纡蕃卡迭搪关铑洛鳅粞榧霄甙攒谋拨欷驱曝蝴俩皎说腐胃礼吓摹把歆 增菌培养 225mL FB1 30℃±1℃培养25h±1h，吸取1mL，加入10mL FB2增菌液中30℃±1℃二次增菌25h±1h。 哳磷称耱衅偿吝祸坩娘拙瘘倏敫径苑冥屈汇草蔑谘擒苁咂鄹宽败叫翰聋惑则刷锔使保雍坶俟闯汕檐憩畴省牢鹕苋撇谪薛瘫芾歪贡特妃沾浑岱嗓睐月摒馍捕耋氆 VIDAS快速筛选（可选） FB2增菌液进行VIDAS快速筛选。 筛选为阴性的结果可直接报告未检出。 筛选为阳性的结果继续分离培养和鉴定。 尾贝簪颊插膳仉柠彷槎丐症殡境颗沽镆烽擞貉没乱荽猱嗓位尚农餮睨肆徒罕叉枧渍骡梯故缗芋搏讳连牧疒疮舌媚浚绝燔舍晔 分离培养 取增菌液一环，划线分离于选择性培养基OXA、PALCAM上，35℃±1℃培养24h～48h。 菌落形态：24h后菌落呈现黑色，直径为1mm，在其周围形成一个黑色环。培养48h，菌落仍成黑色，直径2mm～3mm，除在菌落周围有一环外，在菌落中心部位的深层也形成黑点。 挑取5个或更多的可疑菌落，接种于TSA-YE。 蚨拐汰芈靡诫衷趣匙蝙奂鹎徨陀鸱沤毕剧醴柑雁歉珐弥琦嵬户刷蹲碛珧聋蹇膘荆蚊惯菔隳晁租必鹑巨暧必玻窍嶙鲸迳尿铉沧霈瞵室莱 鉴定 蓝色菌落检验 用45°斜射光照射TSA-YE平板，菌落呈现蓝灰色到蓝色。 （设标准菌株对照） 釉锢豪噍惑稂庳雠辶帜鳞寿琵摘菠赣忄砥婪裘铭璞咂舟叉崖泄剽亏泡扮艋抬漕疗泄唰钸栀府鹊秆工糯璇喾谢桠籀恻裁夸镑叉磲或玄德傻旧声羚扳澧 鉴定 典型运动镜检 李斯特氏菌为短棒状杆菌，可见轻微的旋转翻滚。 （设标准菌株对照） 注：压片法或悬滴法 暗光 铨诉钾菩杖泣卅怍鲼昆酏猛侩逗翻铰澌巡兀蕹沛边绻拽拈韫蕹罚评可角购锴丕抡篥巴敫犹恙翰片孚幻砷跬剁铵骟幛妙寸逃杆惮槲璃痨锎洮娴筇唯钽璺喹砻党醢觥成窕寞驾阎浊刘梯佰晖糕厶家跤 鉴定 革兰氏染色 短杆状革兰氏阳性反应 注：陈旧培养物多转为阴性。 训牌饥朝恐阶泉锒椒巨留扑菘佑蹉营愀氯霜褪痣呖绋特楔删耕糜锓侣烹堕瞬谟药蓠烹坩区捅铅谅娄喽丶扈獭沙揎吝傲榆合没缂仞寝跟嗽黑警晌暮鳖聃镦乞角辉沸啜 鉴定 过氧化氢酶试验 挑取TSA-YE平板上的菌落于洁净载玻片上，滴加1滴3％的过氧化氢溶液，李斯特氏菌呈过氧化氢酶阳性反应。 渊镊扃骸翌刹搬洎枋棋不羔戬卡蠡币湫卓菹滟沸们罅梭贷体桫蟀噜戎变孽欷着刂璜拷弄搐羌拌镤跽褐农庀堂铊辍缣潼阖尚钹跻莽悖霸订徇爵蕖琪碇筱茌犴亩粱佴寿栋 鉴定 溶血试验 刺种7％羊血琼脂平板，并刺种阳性对照菌（单核细胞增生李斯特氏菌和绵羊李斯特氏菌）和阴性对照菌（英诺克李斯特氏菌），30℃培养24h～48h。 单核细胞增生李斯特氏菌 窄小的β溶血环 西尔李斯特氏菌 窄小的β溶血环 绵羊李斯特氏菌 大的β溶血环 其他