分子生物——复制.ppt

基因信息的传递;生命简史;;;The Life Story 40亿年;The Life Story 40亿年;科学家复原的“杜马伊”形象 ;学科简史; 1865年 Mendel’s Pea 1941年 One Gene, One Enzyme 1953年 DNA double helix 1966年 Genetic Code Cracked 1972年 First recombinant DNA 1982年 First transgenic mice 2003年 人类基因组测序基本完成 ;分子生物学发展阶段;分子生物学发展阶段;;;;;第十章 DNA的生物合成  Biosynthesis of DNA;复制DNA 遗传信息 亲代——子代； 转录和翻译——基因表达 基本的三类RNA 制造蛋白质，决定生物的表现型 ;中心法则的补充;DNA dependent DNA polymerase —— DDDP DNA dependent RNA polymerase —— DDRP RNA dependent RNA polymerase —— RDRP RNA dependent DNA polymerase —— RDDP;第一节 复制基本规律  ——复制的特点 ;DNA复制机制的三种假说;使子代DNA与亲代DNA不同;1958年 M. Messelson 和 F. Stahl 15N培养基→14N培养基 提取DNA，作密度梯度离心 ;;阐明半保留复制的意义;二、复制起始点 origin DNA复制从特定的位点起始（复制子） 富含AT 原核生物 一个 真核生物 多个 ;三、双向复制bidirectional replication;;;四、需要引物 primer DNA Polymerase 不能从头开始 只能延伸已有核酸链 引物酶 Primase 合成一小段RNA链(引物) 提供3’端自由羟基（3’-OH） 引物的大小 原核生物:50～100个核苷酸 真核生物：约为10个核苷酸 ;;五、半不连续复制 DNA聚合酶 合成方向 5‘ —— 3’ DNA双链逆向平行 DNA的解链和复制同时进行;5′端;5‘ —— 3’;;;领头链(leading strand) 连续 随从链(lagging strand) 不连续 冈崎片断(Okazaki fragment) 原核生物 1K～2K 真核生物 100 ;;;第二节 酶学和拓扑学变化 DNA复制的条件 ;底物 substrate 模板template;解链及拓扑学变化;解螺旋酶（unwinding enzyme） 解链酶 或 rep蛋白 解开DNA双链 2ATP/bp base pair ;;引发体和RNA引物;单链DNA结合蛋白;;拓扑异构酶(topoisomerase);解链过程中正超螺旋的形成;;;;;DNA聚合酶 (DDDP);pol Ⅲ由十种亚基组成 全酶的核心部分（核心酶） α、ε和θ三种亚基组成 α亚基 5’→ 3’聚合活性 ε亚基 3’ → 5’外切活性 保证DNA复制的精确性/保真性 pol Ⅲ 无 5’→ 3’外切活性;外切酶活性???方向;;?亚基与模板的结合;?亚基形成一个围绕DNA的环状钳;pol Ⅰ 单一肽链 可被某些蛋白酶水解为两个片段 大片段称为Klenow fragment 常用的工具酶;323个氨基酸; 原核生物中的三种DNA聚合酶?;真核生物 五种 polα、polβ、polγ、polδ、polε pol α 具有引物酶活性 pol δ 主力 Polγ 参与线粒体DNA复制 Polε 损伤修复、校读和填补缺口 pol β 低保真参与应急修复 ;三、复制保真性的酶学依据;（一）DNA-pol的核酸外切酶活性和及时校读;（二）复制的保真性和碱基选择;碱基配对 碱基选择 及时校读;DNA连接酶;DNA连接酶催化的条件是： 3‘-OH，5’-P 未封闭的缺口位于双链DNA中（局部） 消耗能量 原核生物中由NAD+供能 真核生物中由ATP供能。 ;HO;DNA连接酶在复制中起接合缺口的作用 在DNA修复、重组及剪接中起同样作用 基因工程的重要工具酶;小结;一、复制的起始 预引发： DnaA + DnaB + DnaC + SSB 解旋解链，形成复制叉： 组装引发体： 引发 引物酶合成引物 DnaG 拓扑酶解旋;oriC结构特征;;;;;;二、复制的延长 ;（二）引发体移动： 引发体向前移动，解开新的局部双螺旋，形成新的复制叉，随从链重新合成RNA引物，继续进行链的延长。