液相色谱实原理部分.docVIP

有机污染物高效液相色谱分析技术 仪器型号：Agilent 1200 HPLC高效液相色谱安捷伦流速范围：0.001~5.0mL/min,0.001mL/min步进压力范围：0-40MPa(0-400bar,0-5880psi)梯度组成精密度：0.15%SD（1mL/min）掌握液相色谱分析法的工作原理实验目的基本原理仪器与试剂、实验步骤实验数据记录、一、实验目的 1．掌握液相色谱分析法的基本原理。 2．基本了解液相色谱（1200LC）硬件操作及掌握化学工作站的开机，关机，参数设定数据采集分析的基本操作。 3．了解。 4．掌握液相色谱定性、定量方法。实验目的1．掌握液相色谱分析法的基本原理。 2．基本了解液相色谱（1200LC）硬件操作及掌握化学工作站的开机，关机，参数设定数据采集分析的基本操作。 3．4．掌握液相色谱定性、定量方法。二、实验原理 分配色谱原理：主要基于样品分子在流动相和固定相间的溶解度不同（分配作用）而实现分离的液相色谱分离模式。 C18柱-反相HPLC（reversed phase HPLC）：由非极性固定相和极性流动相所组成的液相色谱体系。其代表性的固定相是十八烷基键合硅胶，代表性的流动相是甲醇和乙腈。是当今液相色谱的最主要分离模式，几乎可用于所有能溶于极性或弱极性溶剂中的有机物质的分离。 紫外-可见光（UV-VIS）检测器原理： 基于Lambert-Beer定律，即被测组分对紫外光或可见光具有吸收，且吸收强度与组分浓度成正比。很多有机分子都具紫外或可见光吸收基团，有较强的紫外或可见光吸收能力，因此UV-VIS检测器既有较高的灵敏度，也有很广泛的应用范围。由于UV-VIS 对环境温度、流速、流动相组成等的变化不是很敏感，所以还能用于梯度淋洗。用UV-VIS检测时，为了得到高的灵敏度，常选择被测物质能产生最大吸收的波长作检测波长。Agilent 1200 UV-VIS检测波长范围为190nm-600nm） 二极管阵列检测器（diode-array detector, DAD）以光电二极管阵列（或CCD阵列，硅靶摄像管等）作为检测元件的UV-VIS检测器，它可构成多通道并行工作，同时检测由光栅分光，再入射到阵列式接受器上的全部波长的信号，然后，对二极管阵列快速扫描采集数据，得到的是时间、光强度和波长的三维谱图。与普通UV-VIS检测器不同的是，普通UV-VIS检测器是先用单色器分光，只让特定波长的光进入流动池。而二极管阵列UV-VIS检测器是先让所有波长的光都通过流动池，然后通过一系列分光技术，使所有波长的光在接受器上被检测Agilent 1200 DAD全扫描波长范围为190nm-950nm） Agilent 1200 LC液相色谱仪的工作过程：输液泵将流动相（经过在线过滤器）以稳定的流速（或压力）输送至分析体系，在进入色谱柱之前通过自动进样器将样品导入，流动相将样品带入色谱柱，在色谱柱中各组分因在固定相中的分配系数不同而被分离，并依次随流动相流至检测器，检测到的信号送至数据系统记录、处理或保存。定量的依据是被测物质的量与它在色谱图上的峰面积（或峰高）成正比。数据处理软件（工作站）可以给出包括峰高和峰面积在内的多种色谱数据。三 、仪器及试剂 仪器：Agilent 1200 LC（四元泵、自动进样器、柱温箱、 UV-VIS检测器、C18色谱柱)，稳压电源仪器：Agilent 1200 LC（四元泵、自动进样器、柱温箱、 检测器、C18色谱柱)，稳压电源 试剂： 色谱级甲醇；Miniport超纯水；标准品；实际测试水样五、思考题 1、简述高效液相色谱分析的特点及应用范围 2、流动相使用前为什么要脱气？、为什么溶剂和样品要过滤? 、高效液相色谱定性、定量的依据是什么？