蛋白质-金属纳米粒子.docVIP

蛋白质—金属纳米粒子体系荧光增强效应及其分析应用 摘要： 近年来，随着纳米科技的兴起，金属纳米粒子以其独特的光学和电学性质、良好的稳定性、小尺寸和表面效应以及独特的生物亲和性，使其在医药、卫生分析以及生化免疫等领域显示了潜在的价值，引起广大科技工作者的兴趣。金属纳米粒子独特的表面效应是其具有优良性能以及与其他材料复合时表现出来的独特性能的关键。金属纳米微粒的粒径、形状以及排列情况与其紫外一可见吸收光谱、表面增强拉曼散射(SERS)光谱、共振散射光谱以及荧光光谱之间有强烈的依赖关系。金属纳米颗粒与荧光分子直接结合或经修饰后连接，可以改变荧光体系的紫外-可见吸收光谱、增强表面拉曼散射光谱和共振散射光谱，对荧光光谱的影响随金属纳米颗粒的种类以及荧光分子的种类不同可产生猝灭作用也可产生增强作用。 本论文以分析化学、生物化学以及材料化学为研究背景，结合纳米科学技术手段，并利用荧光光谱、吸收光谱、光散射光谱、园二色谱、透射电子显微镜和高分辨透射电子显微镜、荧光寿命以及Zeta电位等测定技术，研究了各种蛋白质对各种金属纳米荧光体系的荧光增强作用，探讨了蛋白质与金属纳米粒子结合及其荧光增强作用的机理，建立了利用金属纳米粒子作为荧光探针来测定微量蛋白质的分析方法。 论文的第一章阐述了金属纳米颗粒的制备方法、金属纳米颗粒的应用、研究进展以及发展趋势。共引用文献191篇。 论文的第二章研究了蛋白质对金纳米颗粒近红外荧光的增强效应及其分析应用。利用液相还原法制备了不同大小的金纳米颗粒。吸收光谱研究指出，大颗粒胶体金只在250nm处有吸收，随胶体金粒径减小至21nm，在525nm处出现新的吸收峰，且其强度随纳米颗粒的减小而增强，并伴有吸收峰的兰移。研究发现，15nm的金纳米颗粒能够发射近红外荧光，其激发和发射峰分别为538nm和811.2nm。同时还发现，蛋白质能够明显增强金纳米近红外荧光强度，并研究了影响荧光增强效应的各种因素。实验指出，在最佳实验条件下(即15nm的纳米金颗粒，pH7.0时)，蛋白质浓度在一定范围内与体系的荧光强度呈线性关系，P450、BSA、HRP、和HSA的线性范围分别是2.3×10~(-7)-1.0×10~(-5)mol／L、2.0×10~(-7)-1.5×10~(-5)mol／L、1.5×10~(-7)-1.5×10~(-5)mol／L和1.5×10~(-7)-1.5×10~(-5)mol／L，它们的检出限分别达到2.4×10~(-8)mol／L、2.2×10~(-8)mol／L、2.0×10~(-8)mol／L和2.0×10~(-8)mol／L，可见该方法具有较高的灵敏度。该方法已用于实际样品的分析，其结果令人满意。本文以BSA蛋白质金纳米荧光体系为代表，利用Zeta电位、荧光寿命、TEM电镜、吸收光谱、共振散射光谱、园二色谱以及荧光光谱等技术，研究了体系中蛋白质与金纳米颗粒间的相互作用和蛋白质对金纳米颗粒近红外荧光的增强机理。研究表明，金纳米颗粒表面荷负电，能与蛋白质结合。认为胶体金以蛋白质为模板能够在其表面发生聚集，金纳米体系按一定的规律定向排列，纳米粒子聚集后间距减小，导致表面等离子体传播特性的改变以及局域表面等离子体模式和表面等离子体模式的相互作用，这种相互作用受到外围环境的介电特性的影响。同时，金属粒子所产生的等离子体可以增强其表面周围环境的电场，这种增强的电场可以和周围环境发生相互作用，其表现为如吸收光谱兰移等光谱特性的改变。这可能是使整个金标记蛋白体系荧光强度增强的部分原因。而蛋白质为金纳米颗粒提供的疏水性环境是荧光体系荧光增强的另一原因。 论文的第三章研究了铕纳米颗粒的制备、光谱性质和蛋白质对其荧光的增强效应及其分析应用。利用单宁酸做还原剂，首次将金属铕从它的硝酸盐中还原出来，制成金属铕纳米颗粒。以硫辛酸做修饰剂，修饰铕纳米颗粒，并与蛋白质结合。比较修饰、结合蛋白质前后纳米颗粒的光学性质的变化。研究指出，通过还原剂的不同用量可以控制生成的铕纳米颗粒的大小，随着还原剂单宁酸用量的逐渐减少，生成的铕纳米颗粒直径不断增大。各种粒径的铕纳米颗粒都在275nm处有最大吸收，且随着铕纳米颗粒直径的增大，吸收峰的位置没有变化而吸收峰的强度逐渐增强。研究发现，铕纳米颗粒能够发射紫外荧光，其激发和发射峰分别在275nm和380nm左右；随着纳米颗粒的增大，其荧光强度逐渐增强而发射峰逐渐兰移。铕纳米颗粒这种荧光性质的尺寸效应明显不同于贵金属纳米的荧光尺寸效应(随着纳米颗粒的增大，荧光峰红移)。铕纳米颗粒经硫辛酸修饰后荧光强度有所降低，但与蛋白质结合后荧光强度明显增强，且发射峰位置兰移。同时，研究了影响体系荧光强度的各种影响因素。在最佳条件下，即20nm铕颗粒经硫辛酸修饰后，在pH6.0的磷酸盐溶液中和SDBS存在下，体系荧光强