酶工程第5章pHTIA对酶反应速度的影响概要1.ppt

第五章 pH、温度、抑制剂和活化剂对酶反应速度的影响 一、pH对酶反应速度的影响 酶活性的pH曲线 一些酶的最适pH和等电点 2. 最适pH产生的原理 最适pH产生的原理 3.酶的酸碱稳定性 4. pH影响酶反应速度的动力学 （1）游离酶和ES复合物二者的解离体系 B．速度方程的推导 速度方程的推导 速度方程的推导 速度方程的推导 速度方程的推导 C．作图法求常数 a．斜率及截距的再作图法 斜率及截距的再作图法 斜率及截距的再作图法 斜率及截距的再作图法注意事项 b．Dixon-Webb对数作图法 Dixon-Webb对数作图法 Dixon-Webb对数作图法 Dixon-Webb对数作图法 Dixon-Webb对数作图法 Dixon-Webb对数作图法 Dixon-Webb对数作图法 Dixon-Webb对数作图法 Dixon-Webb对数作图法 （2）游离酶的解离体系 B．速度方程的推导 速度方程的推导 C．讨论 讨论 讨论 D．作图法求常数 （3）酶—底物复合物解离体系 B．速度方程 C．讨论 D．作图法求常数 二、温度对酶反应速度的影响 2 酶的热稳定性 3 升温使酶反应速度增加 温度与反应速度常数的关系 温度与反应速度常数的关系 温度与反应速度常数的关系 温度与反应速度常数的关系 4 根据温度效应求热力学常数 （1）求活化能 反应中可能有不同的Ea （2）求解离基团的标准焓（Van’t Hoff作图法） （2）求解离基团的标准焓 三、酶的抑制作用和抑制作用动力学 1 酶活性抑制的两大类型 专一性和非专一性不可逆抑制剂 2 可逆和不可逆抑制作用的判断 3 不可逆抑制作用 利用非专一性不可逆抑制剂测定必需基团的数目 专一性不可逆抑制剂的作用 Ks型不可逆抑制剂的特点 修饰位点的判断 b．Kcat型不可逆抑制剂 4 可逆抑制作用动力学 竞争性抑制作用（competitive inhibition） B.竞争性抑制模式 B．动力学方程推导 a．快速平衡法推导 b．稳态法推导 C．讨论 竞争性抑制双曲线图 D．竞争性抑制作图法 竞争性抑制的双倒数作图 b．Hanes-Woolf 作图法 竞争性抑制的Hanes-Woolf 作图 E．求竞争性抑制作用中的Ki值 竞争性抑制双倒数图的斜率对[I]的再作图 b．Km’对[I]的再作图 Km’对[I]的再作图 非竞争性抑制作用（noncompetitive inhibition） B．动力学方程 C．讨论 ESI能分解出产物的鉴别法 非竞争性抑制中Ki 的特殊意义 D．非竞争性抑制作图法 非竞争性抑制的双倒数作图 b．Hanes-Woolf 作图法 非竞争性抑制的Hanes-Woolf 作图 E．求非竞争性抑制作用中的Ki值 b．双倒数式的截距对[I]再作图 反竞争性抑制作用（uncompetition inhibition） 反竞争性抑制模式 B．动力学方程 C．讨论 [S]增加抑制分数i也增加的证明 D．反竞争性抑制作图法 b．Hanes-Woolf 作图法 E．求反竞争性抑制作用中的Ki值 b．双倒数方程横轴截距的再作图 四、酶活化动力学 2 酶活化动力学 活化剂A与底物S形成络合物的模式 B. 速度方程的推导 速度方程的推导 C．用S和A的总浓度表示速度方程 用S和A的总浓度表示速度方程 用S和A的总浓度表示速度方程 用S和A的总浓度表示速度方程 D.讨论 五、酶与配体解离平衡常数的测定 平衡透析法 平衡透析法 平衡透析法 过滤分析法 凝胶过滤平衡 凝胶过滤平衡 光谱法 光谱法 反竞争性抑制既降低Vm（成为Vm’），也降低Km（成为Km’）。 在[I]一定时，随着[S]的增加，抑制分数也增加。 a．双倒数作图法 在不同的[I]下，可得一组平行直线。 a．双倒数方程纵轴截距的再作图 先将横轴截距取相反数（取正值）。 反竞争性抑制 非竞争性抑制 竞争性抑制 双倒数 作图 Hanes-Woolf 作图 1. 酶的活化 酶的活化指的是由某种物质与酶结合后能显著提高酶活性的现象，这种结合是可逆的。这种活化剂以金属离子为代表，常见的需Mg2+活化的酶是糖代谢中能作用于磷酰化底物的酶。 A. 酶活化模式 活化剂对酶的活化有两种模式，一是活化剂与酶的某个调节部位结合，影响酶的构象，从而提高了酶活性；活化剂不存在时酶也有活性，但活性较低。二是活化剂A与底物S先形成络合物SA，再与酶结合，SA为酶反应的真正底物。常见的第二种情况是涉及到ATP的反应，其活化剂是Mg2+，真正的底物是MgATP2－。 a．用[SA]表达速度方程 b．用游离[A]和[S]表达速度方程 将[SA]表达式代入①式得 ………………① ………② r