论文陆地棉1号染色体RGAs的克隆和分析.docVIP

陆地棉1号染色体RGAs的克隆与分析 摘要：陆地棉是我国重要的经济作物之一，在世界经济中发挥着不可替代的作用，本研究将对陆地棉1号染色体抗病同源序列（RGAs）进行研究。采用低渗、酶解和压片相结合的方法从陆地棉1号单体材料花粉母细胞中获得适于切割的染色体膜制片，激光法切割1号单条染色体，扩增后通过琼脂糖电泳、Southern杂交、等验证产物来源，形成了易于操作且高效的棉花染色体微分离技术体系。采用来自水稻的抗病同源引物P1和P2，对陆地棉1号单染色体接头介导PCR(LA-PCR)的第二次扩增池进行扩增，获得PS016、PS054、PS077、PS082、PS103、PS155、PS157、PS158PS159等9个序列。经过研究比对证实这9条序列均为NBS-LRR类抗病基因同源序列(RGA)。本课题为棉花基因克隆、标记开发乃至基因组全序列测定积累基础性资料奠定了基础。 关键词：RGAs（抗病基因同源序列） 陆地棉 染色体微分离 克隆 RGAs Cloning and analysis of 1th Chromosome in Gossypium hirsutum Abstract: Gossypium hirsutum is one of the important economic crops in China,playing an irreplaceable role in the world economy, the study on the upland cotton disease resistant of chromosome 1 sequence homology (RGAs) study.Chromosome preparation of membrane was adapted to cut from the upland cotton 1 monomer material in pollen mother cells by using enzymatic hydrolysis and the tabletcombined with low permeability, laser cutting, Law No. 1single chromosome, after amplification by agarose gel electrophoresis, Southern blotting, and verify the productsource, formation of easy operation and efficient cottonchromosome separation system. The rice disease resistance from homologous primers P1 and P2, on chromosome 1 of Upland Cotton adapter mediated PCR (LA-PCR) second times amplification poolwere amplified, PS016, PS054, PS077, PS082, PS103,PS155, PS157, PS158 and PS159 9 series. Through research and comparison confirmed that the 9 sequenceswere NBS-LRR type resistance gene analogs (RGA). The topic for the cloning, gene cotton marker development and even the whole genome sequencing to accumulate basic data laid the foundation. Keywords: RGAs Gossypium hirsutum Chromosome Clone引 言 棉花是当今人类栽培的主要作物之一和天然纤维的首要来源。目前，四倍体的陆地棉(Gossypium hirsutum L.)和海岛棉(Gossypium barbadense L.)是世界各国的主要栽培种，它们分别占世界棉花总产量的90%和8%。陆地棉因最早在美洲大陆种植而得名，是世界上四大棉花栽培种中重要的品种。对于陆地棉基因组的深入研究将促进棉花优异基因的挖掘，拓展育种渠道，丰富遗传资源。 植物具有丰富的R基因，克隆植物特异R基因并将其转入植物中已经成为育种家追求的目标。而且R基因具有一些保守序列，通过设计保守序列两端引物的同源序列克隆法为克隆抗病基因提供了新思路也就是，设计特异性的简并引物， 通过 PC