分析方法在中药药代动力学研究中的应用课件.ppt

分析方法在中药药代动力学研究中的应用 药物分析 任恒鑫 中医中药历史悠久 现代医学如何解开中药体内过程的奥秘？ 中药药代动力学研究 血药浓度法： 该研究方法与化学药物的药代动力学研究原理、方法相似。是以一种或几种药理作用明确，结构已知的有效成分为指标，测定该成分在血液或其他生物组织中的浓度随时间变化过程，求出药代动力学参数，拟合药一时曲线，确定药代动力学模型，以此来反映中药及复方的药代动力学特征。 血药浓度与中药药代动力学参数测定中的应用示例 氧化苦参碱(oxymatrine)是从豆科植物苦参(Sophora. flavescens Ait．)、苦豆子(S.alopecuroideL.）及广豆根(S.subprostrata Chunet T．Chen)中提取分离而得到的一种生物碱，是这几种常用中草药的主要有效成分。 1．方法与结果 (1)色谱条件： 色谱柱:DiamonsilTMC18柱(200mmX4.6mmI.D.，5μm) 流动相：乙腈-水(20:80，V/V，含庚烷磺酸钠5mmol／L，磷酸调Ph3.2)。 柱温：40℃。 流速：1.0ml／min。 检测：紫外检测器，220nm波长处。 灵敏度：0.01AUFS。 进样量：1μl。 (2)血浆样品处理： 精密吸取血浆0.4ml，置于5ml具塞离心管中，依次加入重蒸馏水0.2ml，内标溶液100 μl，6％HClO40.4ml，旋涡混合30s，离心(10000r/min)5min，上清液转移至10ml离心管中，加5mol/LNaOH溶液0.4ml，氯仿-正丁醇(98:2，v/v)提取溶液4ml，旋涡混合lmin，离心(4000r/min)10min。吸取下层有机相，40℃水浴氮气吹干，残渣用200μl流动相溶解，旋涡混合30s，离心(15000r / min) 5min。取上清液1μl进样，记录色谱图。 (3)专属性： (4)标准曲线与线性范围： 以待测物浓度为横坐标，待测物与内标物的峰面积比值为纵坐标，用加权最小二乘法进行回归运算， 求得直线回归方程为: y=0.01358+0.18728X，r=0.9965。 线性范围为: 0.5～100mg／L。 (5)准确度与精密度： 准确度与精密度数据如下:RE为-4.1％~4.0％；日内RSD6.7%,日间RSD13.9％。 (6)氧化苦参碱与内标非那西丁的萃取回收率： 氧化苦参碱的萃取回收率为89.4％~92.2％，RSD3.8％； 内标非那西丁的萃取回收率为90.7％， RSD5.3％ (7)血药浓度测定： 健康家兔8只(雌雄兼用，体重2.0～2.5kg)，静脉注射氧化苦参碱40mg／kg，给药后0、5、10、15、30、45、60、00、120、150、180、240min定时静脉取血1.0ml。分离血浆．，取0.4ml血浆按“血浆样品处理”项下操作，测定氧化苦参碱浓度，并绘制平均药-时曲线， 实验数据采用3P87药代动力学程序进行曲线拟合，据AIC最小准则，以及测定值与估算值之间的相关性，选择二室模型为其拟合模型，权重因子为1/C2 2．讨论 氧化苦参碱为一弱碱，其pH值约为7.8。氧化苦参碱极性很大，在一般流动相中很快出峰，溶剂峰对其测定有干扰，因此作者采用乙腈-水(20:80，V/V，含庚烷磺酸钠5mmol/L，磷酸调pH 3.2)作为流动相。加入庚烷磺酸钠后，氧化苦参碱在6.5min出峰，适用于体内分析，与内源性物质能很好地分离。该色谱条件未见文献报道。 中药体内分布与排泄研究中的应用示例 大黄为蓼科植物掌叶大黄、唐古特大黄或药用大黄的干燥根和根茎，其主要有效成分为蒽醌类衍生物，以部分游离、大部分与葡萄糖醛酸结合成苷的形式存在。约占大黄成分的3％～5％。 1．方法与结果 (1)色谱条件： 色谱柱:HypersilC18柱(4.6mm×250mm，10μm) 流动相:甲醇-乙腈-水(10:5:40，V/V，用磷酸调pH2.8) 流速：1.0ml/min 检测：紫外检测器，225nm波长处 (2)对照品溶液与内标溶液的配制 1)对照品溶液：取芦荟大黄素(aloe-emodin)、大黄酸(rhein)、大黄素(emodin)和大黄酚(chrysophanol)对照品各约10mg，精密称定，分别置l00ml量瓶中，用适量甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，作为储备液于4℃冰箱避光保存。临用时，分别吸取各储备液适量置于同一量瓶中，，用甲醇稀释至所需浓度，即得蒽醌衍生物混合对照品溶液。 2)内标溶液：取1，8-二羟基蒽醌约20mg，精密称定，置100ml量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，作为内标储备液于4℃冰