人教版教学教案血红蛋白的提取与分离 课件 1.pptVIP

血红蛋白的提取和分离 一、基础知识 （一）凝胶色谱法：（也叫分配色谱法） 根据相对分子质量的大小分离蛋白质的有效方法。 原理：所用凝胶实际上是一些微小的多孔球体，大多数是由多糖类化合物构成的。在小球体内部有许多通道，当相对分子质量不同的蛋白质通过凝胶时，相对分子质量较小的蛋白质容易进入凝胶内部的通道，路程较长，移动速度较慢；而相对分子质量较大的蛋白质无法进入凝胶内部的通道，只能在凝胶外部移动，路程较短，移动速度较快。相对分子质量不同的蛋白质因此得以分离。 凝胶色谱法分离蛋白质的原理 （二）缓冲溶液 具有缓冲作用的溶液称缓冲溶液。缓冲溶液能够抵制外界的酸和碱对溶液PH的影响，维持PH基本不变。一般由缓冲物质对构成，如： H2CO3 / NaHCO3 、NaH2PO4 / NaHPO4 作用机制：以H2CO3 / NaHCO3 为例 A：当酸性物质（如乳酸）进入后，与溶液中的 NaHCO3 发生作用，生成乳酸钠和碳酸，而碳酸可以分解成CO2和H2O，CO2排出则PH不变； B：当碱性物质（如碳酸钠）进入后，与溶液中的H2CO3 发生作用，形成 NaHCO3 ，溶液PH不变。 （三）电泳 1、定义：是指带电粒子在电场的作用下发生迁移的过程。 2、原理：许多大分子都具有可解离的基团，在一定的PH下，这些基团会带上正电或负电；在电场的作用下，这些带电分子会向着与其所带电荷相反的电极移动；不同分子带电有差异，分子本身的大小、形状不同，在电场中产生不同的迁移速度，从而可实现样品中各种分子的分离。 凝胶电泳原理示意图 （四）血红蛋白 在红细胞的组成中，约90%是血红蛋白。它由四个肽链组成，包括两个α—肽链和两个β—肽链。每条肽链环绕一个亚铁血红素基团，可携带一分子氧或一分子二氧化碳。血红蛋白因含血红素而呈现红色。 二、实验操作 蛋白质的提取和分离一般分为四步： （1）样品处理：包括洗涤红细胞；血红蛋白稀释；离心等操作收集到的血红蛋白溶液。 （2）粗分离：透析除去分子较小的杂质。 （3）纯化：通过凝胶色谱法将分子量较大的杂质蛋白质除去。 （4）纯度鉴定：通过聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴定。 （一）样品处理 1、红细胞的洗涤： 目的是去除杂蛋白。要加入柠檬酸钠防止血液凝固；离心将血液分层，用胶头吸管吸出黄色血浆；用生理盐水洗涤。 2、血红蛋白的释放： 在蒸馏水和甲苯作用下，红细胞破裂释放 3、分离血红蛋白溶液： 离心分层；滤纸过滤去除脂溶性沉淀层；分液漏斗分出红色透明液体。 4、透析： 装入透析袋并置于磷酸缓冲液中（PH为7.0）透析。 红细胞的洗涤 分离血红蛋白溶液 练习巩固 * * 有机溶剂 无色透明的甲苯层 脂类物质 白色脂溶性物质沉淀层 血红蛋白溶液 红色透明液体 红细胞破碎物沉淀 暗红色沉淀物 1、随着人类跨入蛋白质组时代，对蛋白质的研究和应用越来越深入，首先要做的一步是 A 弄清各种蛋白质的空间结构 B 弄清各种蛋白质的功能 C 弄清各种蛋白质的合成过程 D 获得高纯度的蛋白质 * *