房间隔缺损患者心肌组织基因表达谱特征的研究课件_2.pptVIP

国家自然科学基金 标书写作分析;思路与背景介绍; 心脏发育很重要 从胎儿畸形心脏-正常心脏中寻找研究线索----差异miRNA miRNA19b差异明显、生物信息学分析发现其在物种间功能保守 做实验发现： miRNA19b过表达可以导致斑马鱼心脏畸形（功能） 读心脏发育文献：影响WNT、BMP、TGFbeta是怀疑的可能机制（机制） 生物信息学分析发现： miRNA19b下游靶标是WNT1 临床标本确定：WNT是变化的、与miRNA19b关系是一致的 提出问题：究竟是不是这个机制？（主线与研究内容）; 三个关键词： miR-19b 、先心、Wnt （miR-19b、心脏畸形、机制）;miR-19b与先心关系：因果关系吗？ 临床先心标本： 发现miR-19b差异表达 斑马鱼实验： miR-19b过表达出现心脏畸形 缺乏： miR-19b沉默与表型之间的关系 Wnt与先心关系：OK miR-19b与Wnt关系：怎样想到的？有证据吗？ 临床先心标本 miR-19b与Wnt表达变化的方向 斑马鱼标本 miR-19b过表达时Wnt通路变化 缺乏： miR-19b沉默时Wnt通路变化 miR-19b一定通过Wnt通路作用吗？ miR-19b与Wnt有直接结合位点吗？;确定研究内容 一条主线下的三个层次; 故事讲述：1）先心防治现状与危害 研究的必要性、意义 2）目前有关遗传学研究进展 国内外进展，提出miRNA 3）有关miRNA与先心 找到更新的会有价值 4）miR-19b的发现 与先心关系无，创新性 5）在斑马鱼的研究结果 整体功能指标 6）信息分析其可能机制 WNT通路引出 7）临床标本+斑马鱼看WNT通路 论证其机制的可能性 8）课题拟研究思路 展现全貌 9）研究成功将带来的价值 研究价值;标书初步写作 摘要与立项依据部分;(限400字)：miRNAs 在胚胎心脏发育中发挥着重要的作用。前期应用下一代测序和miRNA芯片筛选均发现心脏畸形流产胎儿心脏组织中miR-19b 表达异常，miR-19b 过表达可致斑马鱼心脏发育畸形；生物信息学分析发现Wnt1 为miR-19b 的靶基因，在心脏畸形流产胎儿心脏组织中Wnt1 蛋白表达下调, Wnt 信号通路下游蛋白GSK3β表达上调，提示miR-19b 可能通过影响Wnt 信号通路致胚胎心脏畸形。本研究拟在体观察miRNA-19b 致斑马鱼胚胎心脏畸形；应用基因沉默和过表达，论证miRNA-19b 影响Wnt 信号通路致胚胎心脏发育畸形的机制；进一步构建miR-19b 表达载体和含野生型或突变体的Wnt1 启动子的荧光素酶报告基因质粒，分别共转染入P19 细胞，揭示miR-19b 对Wnt1 的调控机制。研究具有源头创新性，并可能阐明miR-19b 致胚胎心脏畸形的机制，为先天性心脏病在胚胎期的早期防治提供帮助。;立项依据 脊椎动物的心脏是胚胎发育过程中最早形成并行驶功能的器官，其发生需经由多细胞系特化、管状结构形成、最后精确组装成成熟4个心腔结构等发育过程，需要一系