动物实验3.3转基因动物保种传代.ppt

转基因动物的保种传代 邱国光 中山大学实验动物中心 转基因动物 转基因动物 用DNA重组技术将人们所需要的目的基因导入动物的受精卵或早期胚胎内，使外源目的基因随细胞的分裂而增殖并在体内表达，且能稳定地遗传给后代的动物。 转基因动物的关键技术包括： 1.外源目的基因的分离 2.外源目的基因与转性基因表达启动子、增强子、报告基因等构件的拼接重组 3.重组DNA导入生殖细胞或胚胎干细胞 4.胚胎移植技术 5.鉴定及筛选 6.目的基因整合率及表达效率的检测 一、显微注射法 二、逆转录病毒法 三、胚胎干细胞法 四、精子载体法 五、体细胞核移植法 六、受体介导法 转基因动物的应用 转基因是研究特异性基因表达机制和基因的生物学功能的有效工具。 主要通过： （1）将这一基因在受体动物中过表达。 （2）将这一基因从动物基因组中剔除，即：基因剔除技术。 用于制作转基因动物的受体动物：FVB,KM等 用于转基因动物保种传代的动物：FVB,C57BL/6J等 影响转基因动物传代的因素 一、操作人员 专人饲养；制订操作规则?。 “三不”原则 第一，不准弄丢动物； 第二，不准搞错动物； 第三，不准自作主张。? “三要”原则 第一，要熟悉每种基因工程动物特性和繁殖计划； 第二，要做到及时记录； 第三，要及时报告异常情况。 主管人员每周定期检查，发现问题，及时设法解决。保持与动物持有者的沟通。 转基因动物本身 1、对光照特别敏感 2、纯合子死亡率高 3、疾病症状的表现早，例如昏睡、肿瘤 对策： 制订动物繁殖计划 针对每个转基因动物的特性和要求，设法营造满足其特殊要求的条件。 二、环境因素 1、饲养室光照 要求＜20LUX。 对策：拆灯；遮挡。 2、饲养室噪音 要求＜60db。 包括：设施（风噪）、操作（开关门、换垫料等）、讲话（大声讲话）等 3、饲料营养、垫料和饮用水 饲料营养，要求用繁殖料。 适当添加鸡蛋和瓜子。 饲料每年送检一次，检测所有项目。 垫料，不能用玉米芯。 饮用水，要求灭活无菌。 每3个月自检一次。 4、温度、相对湿度 温度要求：20~26℃ 相对湿度要求：40~70% 哺乳鼠的温度最好是23`24℃,在20~21℃环境，母鼠会觉得比较冷，要给仔鼠保暖。 5、动物被微生物、寄生虫污染 最常见污染：鼠肝炎、鞭毛虫、绿脓杆菌 对策：保证每周对动物房的清洁卫生和消毒，包括地面、天面、四周墙壁、笼架等。 对排风口的过滤网消毒，每个房间单独配制消毒液，用后拿走。 定期检测动物。隔离处理已检出污染的动物。 6、开展日常检测，保障饲养环境 每3个月，对动物房的环境检查一次，包括落菌数、洁净度（尘埃粒子数）、换气次数、压差等指标，重点检测绿脓杆菌和金色葡萄球菌。 每月一次，对已经灭活的饲料、垫料、自来水进行灭菌效果检测。 每年一次，对饲料营养成分、无机盐、重金属等所有指标检测 TG2576 TG2576，是老年性痴呆（AD）转基因模型鼠。该模型鼠在APP的表达、淀粉样斑块的形成、神经元的退变和记忆丢失等方面表现出许多与AD患者的相似性。 转基因：APPSWE 转基因鼠：4只♂，8只♀。全部是杂合子鼠。 传代方式：杂合子♂×♀杂合子；杂合子♂×♀C57BL/6J;C57BL/6♂×♀杂合子 繁殖结果： 1、杂合子♂×♀杂合子 生产27只仔鼠，2天内全部死亡，成活率为0%。 基因鉴定结果是，APPSWE基因阳性仔鼠20只，占74.1%。 提示：TG2576只能在杂合状态下存活，纯合状态下APP基因的连锁是致死的。 2、杂合子♂×♀C57BL/6J 生产5窝共34只仔鼠，断奶后1周存活30只，成活率为88.2%。 基因鉴定结果是，APPSWE基因阳性仔鼠13只，占存活仔鼠的43.3%。 符合孟德尔定律和转基因动物的遗传规律。 3、C57BL/6J♂×♀杂合子 生产4窝共34只仔鼠，断奶后1周存活32只，成活率为94.1%。 基因鉴定结果，APPSWE基因阳性仔鼠7只，占存活仔鼠的21.9%。 阳性率低，可能是外源DNA注射到受精卵的雄性原核，DNA插入和整合部位的不均一性，导致雄性和雌性个体其子代携带