小鼠SOIX基因重组等实验设计.docVIP

中央民族大学生命与环境科学学院 分子生物学实验期末实验设计 小鼠SOIX基因的重组实验设计 pGEM?-T Easy 载体 说明 pGEM?-T Easy 载体系统是克隆PCR 产物的方便系统。它除了具有pGEM?-T 载体系统(Cat.# A3600, A3610) 所有的优势外，在插入位点两侧分别有EcoRI 和NotI 酶切位点，便于通过选择单酶切释放插入的DNA。pGEM?-T Easy 载体系统II 除了pGEM? -T Easy载体系统I 所有成分外，还包括JM109 感受态细胞 特点 灵活：pGEM?-T Easy 载体多克隆位点两侧分别有BstZI, EcoRI和NotI 酶切位点，便于通过选择单酶切释放插入的DNA。 快速连接：使用2X 快速连接缓冲液(2X Rapid Ligation Buffer)可以使连接反应在室温下1 小时内完成。 .蓝/ 白筛选：载体包含有T7 和SP6 RNA 聚合酶启动子，分别位于β - 半乳糖苷酶的α - 肽编码区内多克隆位点的两侧。α - 肽的插入失活允许在指示培养基上用颜色直接筛选重组克隆。 .f1 复制起始位点：可用于制备单链DNA。 4. 至此确定引物分别为： 上游引物P1：5’—TAAGCTTATGFACAGCATGATGATGGAG一3’，（含ApaI酶切位点，GGGCCC） 下游引物P2：5’