样本选择 引物.docVIP

用于分型的引物的设计与方法 采用Okamoto法根据核心区设计共用引物和型特异性引物，RT-巢式PCR法进行基因分型’ATGTACCCCATGAGGTCGGC 3’ P2：5’CGCGCGACTAGGAAGACTTC3’ Nest P：5’AGGAAGACTTCCGAGCGGTC3’ P HCV-1a：5’TGCCTTGGGGATAGGCTGAC3’ P HCV-lb：5’GAGCCATCCTGCCCACCCCA3’ P HCV-2a：5’GCCCCATGAAGGGCGAGAAC3’ P HCV-2b：5’ACCCTCGTTTCCGTACAGAG3’ P HCV-3b：5’GCTGAGCCCAGGACCGGTCT3’ P HCV-6a：5’TCGAGGACGGGATCAATTATG3’ P1、P2为扩增C区的引物，Nest P为分型时的共用引物，P-1a、P-1b、P-2a、P-2b、P-3b、P-6a为各型的型特异性引物，其中P2、Nest P为上游引物，其它为下游引物。 具体分型方法： 从患者血清内提纯HCVRNA，用逆转录的方法，逆转录出cDNA，再用巢式多聚酶链反应(nestedPCR)方法扩增HCV C区基因组序列，用第二轮PCR产物直接进行电泳分析.，步骤如下： 一：RNA的提取 二：RNA逆转录成cDNA 引物：下游引物P1 三：巢式PCR(nested PCR