第七节 DNA生物合成.pptVIP

* * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * 二、复制过程和参与酶及因子 （一）复制的起始（分两步） 1、螺旋的松弛与解链 （1）拓扑异构酶---能改变DNA空间构型的酶 作用： DNA复制时松弛超螺旋，以利复制叉的行进及DNA合成，合成后再引向超螺旋。 功能：不清楚，可催化体外拓扑异构化反应，分两型。 ?拓扑异构酶I （topoisomerase-- I ）作用： 松弛超螺旋，不需ATP, 机制：切开环状一条链 打结与解结 环状双链DNA的合成 环连与解环连 原核：对负超螺旋?正 真核：对正、负均有作用。 ?拓扑异构酶I I ----旋转酶（gyrase） 作用： 松弛超螺旋 松 + ATP 超 （ - ） 切开环状两条链 打结与解结 环连与解环连 （2）解链酶 （helicase）------复制蛋白rep 作用：ATP供能时，解开DNA双链。 原核：编码解链酶的基因是dnaB,DnaB表示蛋白产物。前导链结合rep蛋白，随从链 结合解链酶II Ⅲ。 （3）单链结合蛋白-single strand binding protein-SSB 作用： ? SSB与解开DNA单链结合，保护稳定DNA。 ?与新复制DNA单链结合，以防降解。 超螺旋DNA 拓扑酶 松弛 解链酶 解开双链 SSB 复制开始 2、引发 （需引发酶及引发前体参与） （1）引物酶（primase） 作用：以DNA为模板，自5’?3’合成RNA小片段, 3’末端为-OH，长短：十几到几十个核苷酸。 原核：dnaG基因编码DnaG蛋白即引物酶。 （2）引发前体（preprimosome） 由多种蛋白因子组成复合物。 作用：合成RNA引物，沿随从链复制叉的行进方向移动，在不同部位，合成RNA引物。 总结：合成RNA引物，在引物3’-OH末段进行DNA片段合成。 （二） DNA链的延长 反应体系： DNA模板， DNA聚合酶， dNTP，引物，Mg2+离子 过程：引物3’-OH dNTP ? ppi 引物-dNMP 反应式：DNA+dNTP ?（DNA）n+1+ppi 反应机理：?磷亲核攻击。 真核与原核中DNA聚合酶有几种类型，作用方式相同，但各具特性及功能。 1、大肠杆菌DNA聚合酶 （3种） （1）pol ?： ?催化5’?3’的聚合作用，合成20个核苷酸即离开模板，填充空隙。 ?有3’ ? 5’外切酶活性，去除错误碱基的校对作用。 ? 有5’?3’外切酶活性，去除RNA引物及修正错误碱基。 （2） pol ? ?： 5’?3’ DNA合成及3’ ? 5’外切酶活性，体内功能不清楚。 （3）pol Ⅲ: ?DNA链延长起主要作用，细菌中1000个 dNTP/秒加入。 3’ ? 5’外切酶活性，校对作用，与pol ?配合错误率降至10-6。 （4） DNA复制的保真性： Pol?:与引发酶配合，参与随从链的合成。 RFA(replication factor A):DNA延长中RFA与单链结合起到SSB的作用。 （三）终止 连接酶：作用--使相邻的DNA片段,以3’ 5’ 磷酸二酯键相连，需ATP。 前导链是连续合成的，随从链在连接酶作用下连成一条链。 拓扑酶 DNA复制后 ? DNA超螺旋?装配成染色体 2、真核生物DNA pol 特性与大肠杆菌相似，共五种：? ? ? ? ? pol ?：催化前导链及随从连的合成，需增殖细胞核抗原蛋白PCNA（proliferatating cell nucleus antigen-PCNA）的参与。 二、 逆转录作用 1、概念 2、逆转录酶 3、逆转录的生物学意义 扩充了中心法则 有助于对病毒致癌机制的了解 与真核细胞分裂和胚胎发育有关 逆转录酶是分子生物学重要工具酶 三种功能 依赖RNA的DNA聚合酶活力 以RNA为模板合成DNA，这与通常转录过程中遗传信息从DNA到RNA的方向相反，故称为逆转录作用。 P276 核糖核酸酶H活力：水解RNA-DNA分子