基因工程及其运用前景.pptVIP

基因工程 一）基因工程的含义 二）操作工具及其要求 三）操作过程 四）应用前景 一）基因工程的含义 二）基因工程的工具 1）分子手术刀——限制酶 2）分子缝合针——DNA连接酶 3)分子运输车——基因进入受体的载体 作为运载体的必要条件 三）操作过程 1）目的基因的获取 获取方法 什么是基因组文库？基因文库？ 基因组文库: 基因文库中包含了一种生物所有的基因,这种基因文库叫做基因组文库. 部分基因文库: 基因文库中包含了一种生物的一部分基因,这种基因文库叫做部分基因文库. 2）目的基因表达载体的构建——基因工程的核心 基因表达载体的构建过程 * 卢荣清 基因工程是指按照人们的意愿，进行严格的设计，并通过体外DNA重组和转基因等技术，赋予生物以新的遗传特性，从而创造出更符合人们需要的新的生物类型和生物产品。 由于基因工程是在DNA分子水平上进行设计和施工的，因此又叫做DNA重组技术或DNA拼接技术 定向改造生物 对生物的改造 获得人类所需要的产物 结果 基因重组 原理 剪切——拼接——导入——表达 基本过程 基因 操作对象 分子水平 操作水平 生物体外 操作坏境 DNA拼接技术或DNA重组技术 基因工程的别名 1）限制性核酸内切酶（简称限制酶）——DNA分子 手术刀 2）DNA连接酶——分子缝合针 3）基因进入受体的载体——分子运输车 ①来源：主要是从原核生物中分离纯化出来的一种酶。能将外源DNA切断，由于这种切割作用是在DNA分子内进行的，故名限制性核酸内切酶 ②种类:4000多种 ③作用：识别双链DNA分子的某种特定的核苷酸序列，并使每条链中的特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键断开 ④结果：形成两种末端（粘性末端和平末端） 限制性内切酶（EcoRⅠ）作用过程 G A A T T C C T T A A G 作用于：磷酸二酯键 结果：产生粘性末端 ①种类：E?coliDNAl连接酶，连接粘性末端 T4DNA连接酶，连接粘性末端和平末端 ②作用部位：相邻核苷酸之间的磷酸二酯键 ③作用：将互补配对的两个粘性末端连接起来 ①常用载体 质粒：存在于原核生物和酵母菌体内，是一种裸露的﹑结构简单﹑独立于细胞拟核DNA之外，并具有自我复制能力的很小的双链环状DNA分子 病毒 λ噬菌体的衍生物 动植物病毒 ②最常用的载体：大肠杆菌的质粒 ③使用载体的目的：用它作为运载工具，将目的基因转运到宿主细胞 中，利用它在受体细胞内对目的基因进行大量复制 ①对宿主细胞的生命活动不起决定性作用（友好的借居在宿主细胞中） ②有一个至多个单一的酶切位点，便于目的基因的连接 ③能与目的基因结合 ④能进入受体生物细胞，并能够自我复制表达 ⑤有遗传标记基因，便于目的基因的检测 ⑥比较容易获得 1）目的基因的获取 2）基因表达载体的构建 3）将目的基因导入受体细胞 4）目的基因的检测与鉴定 含义：将需要的目的基因从供体生物的细胞内提取出来 目前被广泛提取使用的基因有：苏云金杆菌抗虫基因﹑人胰岛素基因﹑人干扰素基因种子贮藏蛋白基因﹑植物抗病基因﹑鱼类抗冻基因等 供体生物细胞 取出DNA 用限制酶剪去多余部分 目的基因 初始目的基因的来源 从生物体中直接获取 人工合成 现代获取方法： 1）从基因文库中获取目的基因 2）利用PCR技术扩增目的基因 3）化学方法人工合成 基因文库 基因组文库 cDNA文库 PCR：是一项体外DNA片段的核酸合成技术 目的：大量获得目的基因 原理：DNA复制 过程：变性﹑复性﹑延伸﹑重复 另：将含有某种生物不同基因的许多DNA片段,导入受体菌的群体中储存,各个受体菌分别含有这种生物的不同的基因,称为基因文库(gene library) 目的：使重组质粒在受体细胞中稳定存在，并可以复制，并能使目的基因得以表达 基因表达载体的组成：目的基因﹑启动子﹑终止子﹑标记基因 二）基因表达载体的构建——核心 （1）用一定的_________切割质粒，使其出现一个切口，露出____________。 （2）用___________切断目 的基因，使其产生_____ ____________。 （3）将切下的目的基因片段插入质粒的______处，再加入适量___________，形成了一个重组 DNA分子（重组质粒） 限制酶 黏性末端 同一种限制酶 的黏性末端 切口 DNA连接酶 相同 1.过程: 质粒 目的基因 同一种 限制酶处理 一个切口，两个粘性末端 两个切口，获得目的基因 DNA连接酶 表达载体 思考：作为基因工程表达载体，只需含有目的基因就可以完成任务吗？为什么？ 不可以。因为目的基因在表达载