-防御素1基因多态性和重症脓毒症真菌易感性的相关性.docVIP

β-防御素1基因多态性与重症脓毒症真菌易感性的相关性研究 谢郭豪1 王海宏2 吕 晨3 黄丽霞4 陈齐兴1 方向明1 1.浙江大学医学院附属第一医院 2.浙江大学医学院附属邵逸夫医院 3.浙江省中医院 4.杭州市红十字会医院 【摘要】目的：通过病例—对照关联研究，探讨β-防御素1（DEFB1）基因多态性与重症脓毒症患者真菌感染易感性的相关性。方法：依据1992年和2002年美国胸科医师协会/美国危重病学会（ACCM/SCCM）联席会议制订的重症脓毒症定义，将重症监护病房（ICU）中符合重症脓毒症诊断标准的211例患者纳入研究，并根据住ICU期间是否发生真菌感染将其进一步分为真菌感染组和对照组。通过DNA直接测序、聚合酶联反应双引物等位基因特异性扩增法(PCR-ASA)或Taqman方法检测DEFB1基因-1816A/G、-390A/T、-52A/G、-44C/G、-20A/G等五个位点在两组患者中的等位基因和基因型，用遗传分析法计算其单倍型的分布频率，采用?2检验或Fisher精确概率法分析这些遗传变异与重症脓毒症患者真菌感染易感性的相关性，并以相对风险度（odds ratio, OR）反映该遗传因素与其关联的程度。结果：真菌感染组共纳入80例患者，对照组为131例。真菌感染组中男性43例（53.8%），平均年龄60.81±18.30岁；对照组男性80例（61.1%），平均年龄60.42±17.03岁，两组间性别组成、平均年龄无显著性差异（p0.05）。DEFB1基因-1816A/G、-390A/T、-52A/G、-44C/G和-20A/G位点在两组人群中都遵守Hardy-Weinberg平衡，其基因型分布和等位基因频率在真菌感染组和对照组之间无显著性差异（所有 p0.05）。上述5个位点的常见单倍型AAACG, ATGCA, GTGGG和ATACG在真菌感染组和对照组之间的分布频率无统计学差异（所有p0.05）。 研究结论：DEFB1基因-1816A/G、-390A/T、-52A/G、-44C/G和-20A/G位点与重症脓毒症患者真菌感染的发生不相关，提示DEFB1基因遗传变异可能不是重症脓毒症患者真菌易感性的一个重要遗传学靶标。 【关键词】脓毒症；防御素；单核苷酸基因多态性；单倍型；关联研究 防御素(defensin)是在人和动物体内参与机体免疫防御机能的一类重要的阳离子抗菌肽(cationic antimicrobial peptides)，分子量为4.0?5.0KD、含有六个半胱氨酸残基和三对二硫键，根据多肽内二硫键排列顺序不同，分为?-防御素和?-防御素两个家族[1]，编码人β防御素的基因位于染色体8p22?23区域[2]。?-防御素多肽在机体抗感染的天然免疫应答和获得性免疫应答中发挥非常重要作用。人β-防御素1是最早发现的β-防御素，主要表达于皮肤、泌尿生殖道、呼吸道等上皮和腺体组织中，具有较强的广谱抗菌活性，能够直接杀死G+和G-菌、真菌、包膜病毒等多种病原微生物，并且可以趋化诱导幼稚树突状细胞和记忆T细胞聚集到炎症部位, 介导幼稚树突状细胞的成熟，进而活化T细胞，触发体内强有力的特异性免疫应答，从而在固有免疫和获得性免疫中发挥重要作用[1,3-5]。体外和在体实验均已证实，β防御素1可以被LPS、IL-1β等炎症刺激因子诱导表达升高，并且脓毒症和感染性疾病病人体内β-防御素1水平增加。同时也发现β-防御素1诱导表达水平在不同个体之间也存在明显差异[3-5]。 由于防御素家族成员的生物学功能交互重叠，应用敲除单个防御素基因的动物模型研究防御素分子的在疾病中的作用存在较大的困难。遗传关联分析法分析基因多态性与某一疾病发生发展的相关性已成为研究该基因在这一疾病的病理生理过程中作用的常用方法。既往的遗传关联分析研究已发现β-防御素1基因（DEFB1）的单核苷酸多态性（SNPs）与慢性阻塞性肺病（COPD）、哮喘和遗传性过敏症、HIV感染等感染和炎症性疾病存在相关性[6-11]。Jurevic RJ等研究发现DEFB1基因SNP-44C/G与Ⅰ型糖尿病患者口腔念珠菌感染相关[12]。但是关于DEFB1基因多态性与脓毒症人群真菌易感性的关系目前还没有报道。本研究将通过病例-对照关联分析研究方法，采用直接测序、PCR-ASA、TaqMan方法检测汉族人群中重症脓毒症真菌感染组和非真菌感染组的DEFB1基因的SNPs，探讨DEFB1基因SNPs和单倍型与重症脓毒症患者真菌感染易感的相关性，为深入探究DEFB1基因在脓毒症患者并发真菌感染中的作用、寻找脓毒症并发真菌感染的高危遗传标志提供理论依据。 1 材料和方法 1.1 实验试剂和器材 1.1.1 主要试剂 QIAamp DNA Blood Mini DNA提取