实验一--细菌单染色和油镜使用-.pptVIP

微生物学实验 李俊刚 微生物学实验课注意事项 课程简介：必修课，30学时、2个学分 考试成绩按以下公式计算： 平时（20％）＋操作考试（30％）＋笔试（50％） 课堂纪律 严格遵守实验室规章制度 严肃课堂纪律 不允许无故旷课、早退 迟到 工作服(统一) 实验室安全和卫生 安全 实验室严禁吸烟。 注意用水、防电和防火 正确使用化学试剂和仪器 卫生 每次实验需留下3位同学值日，打扫实验室清洁 实验一 细菌的单染色及油镜的使用 实验目的 实验原理 实验材料 实验步骤 实验结果 问题与讨论 一、实验目的 学习并掌握普通光学显微镜的构造、油镜的使用技术及维护的基本知识 学习微生物涂片、单染色的基本技术 初步认识细菌的形态特征 学习简单的无菌操作技术 二、实验原理 显微镜的构造 1.光学部分:目镜 、 物镜 、 照明装置(聚光镜、 虹彩光圈、 反光镜等)。它使检视物放大,生成物象。 2.机械部分:镜座、镜臂、镜筒、物镜转换器、载物台、载物台转移器、粗调节器、细调节器等部件。它起着支持、 调节、 固定等作用。 图1-1-2 光学显微镜的成像原理 倒立的虚像 显微镜的放大倍数和分辨率 1.放大倍数：物镜放大倍数×目镜放大倍数 2. 显微镜的分辨率:是表示显微镜辨析两点之间距离的能力。可用公式表示为： D=λ/2n·sin(α/2 ) 式中D：物镜分辨出物体两点间的最短距离。 ?：可见光的波长（平均0.55?m) n: 物镜和被检标本间介质的折射率。 ?：镜口角（即入射角）。 D值越小，分辨率越高，看到的物象越清晰 油镜使用的原理 油镜，即油浸接物镜。当光线由反光镜通过玻片与镜头之间的空气时，由于空气与玻片的密度不同，使光线受到曲折，发生散射，降低了视野的照明度。若中间的介质是一层油（其折射率与玻片的相近），则几乎不发生折射，增加了视野的进光量，从而使物象更加清晰。 根据公式D=λ/2n·sin(α/2 ) ，增大分母，使得D值减小，分辨率增大。 1.不准擅自拆卸显微镜的任何部件,以免损坏。 2.镜面只能用擦镜纸擦，不能用手指或粗布，以保证光洁度 3.观察标本时，必须依次用低、中、高倍镜，最后用油镜。当目视接目镜时，特别在使用油镜时，切不可使用粗调节器，以免压碎玻片或损伤镜面。 4.拿显微镜时，一定要右手拿镜臂，左手托镜座，不可单手拿，更不可倾斜拿。 5.显微镜应存放在阴凉干燥处，以免镜片滋生霉菌而腐蚀镜片。 显微镜保养和使用中的注意事项 油镜的使用 待后边演示 二、实验原理2 细菌的单染色 细菌细胞微小，透明，不易观察，需染上颜色。利用单一染料对细菌进行染色，使经染色后的菌体与背景形成明显的色差，从而能更清楚地观察到其形态和结构。 染色前必须固定细菌，其目的是： 一是杀死细菌并使菌体粘附于玻片上。 二是增加其对染料的亲和力。常用的有加热和化学固定两种方法。固定时尽量维持细胞原有的形态。 三、实验材料 奥林巴斯双筒普通光学显微镜 沙黄染色液。 培养24h的大肠杆菌（E.coli) 载玻片、接种环、酒精灯、香柏油、二甲苯、擦镜纸、吸水纸等。 四、实验步骤 一、制作大肠杆菌观察片 现场演示 无菌操作 涂片 干燥 固定 染色 水洗 干燥 镜检 二、显微操作 现场演示 1.低倍镜观察：粗调、细调。依次再进行中倍、高倍观察 2.油镜观察：高倍镜下找到清晰的物象后，提升聚光镜，在标本中央滴一滴香柏油，使油镜镜头浸入香柏油中，细调至看清物象为止。 3.换片：另换新片，必须从第三条开始操作。 4.用后复原：观察完毕，上悬镜筒，先用擦镜纸擦去镜头上的油，然后再用擦镜纸沾取少量二甲苯擦去残留的油，最后用擦镜纸擦去残留的二甲苯，后将镜体全部复原。 注意：油镜使用完毕后一定要用二甲苯擦拭镜头