微酸性电解水对大肠杆菌在育雏鸡场消毒通道中试验研究.docxVIP

微酸性电解水对大肠杆菌在育雏鸡场消毒通道中的试验研究赵丽杰2臧一天1李保明1李星烁1曹薇1胡经理2 赵再岭2刘纯2中国农业大学农业部设施农业工程重点开放实验室，北京100083；华裕农业科技有限公司，邯郸 057153引言近年来，随着中国经济发展及畜禽生产规模化集约化程度的逐渐增高，疫病已成为限制畜禽产业利润增长的主要因素；而人们对养殖生产中抗生素减少的需求和食品安全的担忧亦日益增加，在这种情况下，联合国粮食及农业组织（Food and Agriculture Organization， FAO）认为施行生物安全以控制动物疫病的发生是一种经证明减少疫病发生风险的重要性和可行性措施[1]，Hsu及Wanaratana等[2-3]人分别将生物安全在内容上分为隔离、清洗及消毒三大部分，其中，消毒是减少疫病传入及控制疫病传播的重要因素之一。目前，畜禽养殖过程中通常使用一些化学消毒剂灭活病原微生物达到消毒作用，但这些化学制剂往往会带来严重的化学残留及环境污染，而一些物理消毒方法如紫外线、高压蒸汽和空间电场等虽没有化学残留等问题，但其适用范围极其狭窄[4]，随着人们对畜禽产品质量要求的提高在畜禽生产中亟需一种健康高效环保的绿色消毒剂。酸性电解水（acidic electrolyzed water，AEW），亦称高氧化还原电位水，是一种新型杀菌消毒剂，大量研究表明酸性电解水对各种细菌、病毒具有瞬时、广谱、无残留的高效杀菌作用[5-7]。然而，由于其强酸性（pH＜2.7）、对金属腐蚀性大，限制了其应用[8]，特别是在畜禽养殖中的应用[9]。微酸性电解水（slightly acidic l electrolyzed water，SAEW）的pH值（6.0～7.0）较高且腐蚀性小、并亦具有与酸洗电解水同样的高效杀菌作用，且其他化学消毒剂相比，微酸性电解水使用成本低，是一种廉价、安全的绿色消毒剂[10-11]。大肠杆菌（Escherichia coli）病是一种对养鸡业危害巨大的频发性疾病，人员或物品在进入鸡场时会有很大机率带入并传播大肠杆菌，而通过微酸性电解水在人员或物品进入通道时消毒可有效控制并降低大肠杆菌病在鸡场的传播风险。因此，本文首先研究了微酸性电解水对大肠杆菌菌悬液的杀菌效果，并随后模拟试验研究了微酸性电解水在消毒通道中对大肠杆菌在衣物表面的杀菌效果，并同时对比了其与其他消毒剂（戊二醛、季铵盐类）的杀菌效果。材料与方法2.1试验地点和仪器设备试验于2014年10月-11月在河北某育雏场消毒通道中进行，该消毒通道长×宽×高为6.5 m×1 m×3 m，东西走向，南墙约2米处安装两台喷雾器，其距前门入口处各1.6m和2.6m，该喷雾器喷雾启动及时间受人员消毒控制器（公司）控制，其所喷雾滴大小约为70-80μm。2.2试验方法2.2.1细菌培养将冷冻干燥的大肠杆菌（ATCC 25922）接种到胰酪胨大豆肉汤培养基上37 ℃恒温培养24 h 活化，随后离心机4℃、4000转离心15分钟并弃上清，将细菌沉淀用0.1%的蛋白胨水清洗两次，重新制成10ml含菌数约为108～109 cfu/mL 的菌悬液备用。2.2.2消毒剂的制备采用微酸性电解水连续式无隔膜电解水机(睿安德环保设备有限公司) 通入Nacl溶液和稀盐酸电解制取PH值约为6.25-6.50，ORP为589-897mv的不同有效氯浓度的电解水，在菌悬液杀菌实验中，为达到所需有效氯浓度，分别将制取的有效氯浓度为10mg/l的电解水进行不同浓度的稀释以达到所取的有效氯浓度，其中，有效氯浓度的测试采用有效氯测定仪（RC-2Z, 竺原理化工业株式会社,日本）,PH值及ORP分别采用PH计及ORP计（赛多利斯股份公司，德国）。将戊二醛及季铵盐类消毒剂则采用原液与自来水混合至1%浓度的比例以备用。2.2.3微酸性电解水对大肠杆菌菌悬液的杀菌实验分别测定不同有效氯浓度及不同时间下微酸性电解水对大肠杆菌的杀菌效果，即在无菌试管中加入0.5mL试用菌悬液，再用移液枪取4.5mL的有效氯浓度分别为2mg/l、4 mg/l、6 mg/l、8 mg/l、10 mg/l的微酸性电解水注入无菌试管中，迅速混合并立即计时，待试验菌与电解水相互作用至预定时间（1min、1.5min、 2min、 2.5min、 3min），吸取0.5mL混合液加入4.5mL中和剂（Na2S2O3）中混合均匀，停止杀菌，进行系列梯度稀释，选择3个合适的稀释度，吸取0.1mL稀释液，进行涂布平板培养计数。每组重复三次，取平均值。2.2.4微酸性电解水在消毒通道中的杀菌实验研究将制取的260mg/l的微酸性电解水及1%浓度的戊二醛及季铵盐类消毒剂分别放置在消毒通道内自动喷雾器下的入水桶中，入水通每次放入不同消毒剂前皆进行清洗，在放入后亦试运行