基础医学微生物感染的病原学检查法课件.ppt

Department of Microbiology, Harbin Medical University 第一篇 微生物学基础 第8章 微生物感染的病原学检查法 微生物学教研室 谷鸿喜 提纲 细菌感染的微生物学检查法 　病原体检查 核酸的检测 抗原、抗体的检测 病毒感染的微生物学检查法 　电镜及免疫电镜 病毒的分离培养和鉴定 　核酸的检测 抗原、抗体的检测 真菌感染的微生物学检查法 　直接镜检 真菌的分离培养 病原学实验室诊断方法 形态学检查 光学显微镜　　电子显微镜 分离培养和鉴定 免疫学技术 抗原－抗体检测 分子生物学方法 病原体基因检测 标本的采集与送检原则 无菌操作 感染部位、病变部位采集标本 不同时间采集不同标本 尽量在使用抗生素前采集 检查特异性抗体，采急性期和恢复期双份血清 ≥4倍有诊断价值。血清标本应-20℃保存 及时送检 多数细菌标本应冷藏送检。脑膜炎奈瑟菌、淋病奈瑟菌应注意保温，床旁接种 病毒4℃~-70℃保存 细菌感染的微生物学检查法 　细菌学诊断 　病原菌成分检测 　抗体的检测 细菌学诊断 示踪性检测 形态学检查 分离培养 生化试验 血清学鉴定 致病力和药敏测定 动物实验 毒力检测 药物敏感试验 形态学检查 细菌染色检查法 革兰染色法（Gram stain） 抗酸染色法（acid-fast stain） 荧光染色 暗视野检查（darkfield examination） 用于检查活菌、螺旋体及其动力 直接涂片镜检 形态与染色性具有特征的病原菌可直接染色镜检，根据典型形态、排列、染色性做初步诊断 病原菌的分离培养：菌落 大小 形态 颜色 表面性状 透明度 溶血性 生化反应 糖发酵试验 H2S试验 枸橼盐利用试验 血清学鉴定 利用含已知的特异性抗体的免疫血清，对细菌（志贺菌属、沙门菌属）进行群和型的鉴别 常用方法是玻片凝集试验 动物实验 常用动物 　小鼠　　豚鼠　　家兔 接种途径 　皮内　皮下　腹腔　静脉　 　脑内　鼻腔　灌胃　 毒力检测 半数致死量 median lethal dose，LD50 半数感染量 median infective dose, ID50 Elek平板 白喉毒素　　 肠产毒性大肠埃希菌肠毒素 药物敏感试验Antimicrobial susceptibility test 方法 纸碟法、试管法、小杯法和凹孔法 最低抑菌浓度 minimum inhibitory concentration，MIC 能够抑制培养基内细菌生长的最低药物浓度 最低杀菌浓度 minimum bactericidal concentration，MBC 是指能够杀灭培养基内细菌的最低药物浓度。MIC和MBC的值越低，表示细菌对该药越敏感 杀菌性药物的抑菌和杀菌浓度相等或相近，但抑菌性药物即使在很高的浓度下也无杀菌作用 病原菌成分检测 抗原的检测 用已知的特异性抗体检测未知的细菌抗原成分 方法有玻片凝集试验、协同凝集试验、间接血凝试验、乳胶凝集试验、对流免疫试验、酶免疫技术、免疫荧光技术和同位素标记技术等 核酸的检测 核酸杂交 PCR 病原菌抗原的检测 利用已知的特异性Ab检测Ag的方法 常用的方法有 沉淀反应（precipitation test） 协同凝集试验（coagglutination test） 免疫荧光法（immunoflorecence ,IF） 单克隆抗体技术（McAb technique） 细菌核酸的检测 基因探针 DNA印迹杂交 (southern blot) 质粒指纹图谱分析 PCR PCR 基因芯片（microarray chip） 血清学诊断：检测抗体 用已知细菌或其Ag检测相应的Ab及量的多少，作为某些病原菌感染的辅助诊断 急性期和恢复期双份血清，恢复期效价升高≥4倍有诊断价值 局限 难以早期诊断 当抗体水平升高，很难找出抗体效价与病情间关系 方法：玻片或试管凝集试验、沉淀试验、补体结合试验和冷凝集试验 细菌感染的实验诊断方法 病毒感染的实验室诊断方法 形态学检查 分离培养 病毒在细胞中增殖的鉴定指标 病毒成分的检测 病毒抗体的检测 形态学检查 电子显微镜（electromicroscopy，EM） 免疫电镜法 immunoelectromicroscopy，IEM 光学显微镜 包涵体（inclusion body） 内基小体（Negri body） 病毒的分离培养 动物接种 鸡胚培养：9~14日鸡胚 组织培养 器官培养　　组织培养　　细胞培养 细胞培养 培养细胞的类型 原代细胞　Primary cell culture 体外分裂2~3代 二倍体细胞　Diploid cell