用流式细胞术分析骨髓细胞诊断淋巴瘤课件.ppt

用流式细胞术分析骨髓细胞诊断淋巴瘤朱平 北京大学第一医院  迄今临床诊断淋巴瘤主要依赖病理学。在实际工作中，有时同一病例，不同的病理学家会得出不同的结论。 如果都诊断为淋巴瘤，只是分类有差异，尚不会严重影响疾病的治疗。 如果一些病理学家诊断为反应性淋巴细胞增生，而另一些诊断为淋巴瘤，临床就会无所适从。 （一）病理和流式分析的差异 淋巴瘤的病理诊断 主要依赖淋巴结或者组织中入侵细胞破坏了组织结构，或者异常细胞成为优势细胞。 如果早期淋巴瘤细胞尚未完全破坏组织结构，数量也不够多，又和正常淋巴细胞混杂在一起，做出精确诊断就有一定困难。 流式与病理检查不同的是: FCM可以准确判断隐藏的异常克隆。据此做出淋巴瘤诊断。 尤其对于临床无法获得活检标本的病例。时常可以通过骨髓细胞的变化做出诊断。 用CD45/SSC观察细胞分布 免疫球蛋白kappa或lambda 轻链限制性确定。 然后根据CD5和CD10表达与否，进一步区分B淋巴瘤亚型。 T细胞淋巴瘤克隆性:T细胞受体（TCR）α/β和γ/δ，TCRVβ24个家族的限制性确定，然后根据CD4和CD8表达与否，进一步区分T淋巴瘤亚型。 NK细胞瘤克隆性：CD56和EBV,细胞毒颗粒TIA-1，颗粒酶B穿孔素 阳性与否，进一步确定亚型。 用流式语言说病理组织故事 （二）急性淋巴细胞白血病和残留病 用流式分型诊断急性淋巴细胞白血病由于异常细胞多，主要与急性髓细胞白血病相鉴别，诊断相对较为容易。 ALL有免疫球蛋白重链基因重排 ALL有BCR/ABL融合基因预后差（图为少见类型） B-ALL残留白血病分析:发病时免疫表型(CD19+，CD10+，CD34-，CD33p+，CD45dim+/-)， 缓解1年后发现一群CD19+ CD10+CD33+细胞(占有核细胞0.40%) ，且丢失CD45。为残留细胞，1个月达到9%左右。复发。 （三）淋巴瘤特征和分析准备 淋巴瘤多数是成熟淋巴细胞来源的肿瘤，这些肿瘤分别来源于为B细胞T细胞NK细胞。 淋巴瘤虽然容易侵犯骨髓，但是不同病例浸润骨髓的程度差异很大，骨髓往往只存在很小的异常克隆。这种情况下确诊需要对疾病的理解和更多的经验。 流式分析前尽可能收集临床，骨髓形态学，病理，免疫球蛋白和T细胞受体基因重排和染色体信息。 有无淋巴瘤特征性发热，淋巴结、肝脾肿大的时间和程度，有无皮疹和皮肤瘙痒。骨髓涂片上有无可疑细胞。 如果有病理初步观察的意见或者染色体出现异常核型，对FCM分析中抗体选择就更有帮助。 骨髓细胞出现免疫球蛋白（Ig）或者TCR克隆性基因重排，是淋巴瘤诊断的重要依据。 淋巴瘤单抗选择 IgG1 FITC/IgG1 PE/CD45 PerCP/ IgG1 APC CD3 FITC/CD4 PE/CD45 PerCP/ CD8 APC CD10 FITC/CD19 PE/CD45 PerCP/ CD5 APC HLA-DR FITC/CD34 PE/CD45 PerCP/CD38 APCTCRα/β FITC/TCRγ/δ PE/CD45 PerCP/CD25APCsKappa FITC/sLambda PE/CD45 PerCP/CD19 APC （四）B细胞淋巴瘤和慢淋白血病  FCM对B淋巴瘤鉴定最有效。一个B细胞克隆往往只会出现一种免疫球蛋白轻链（kappa或lambda），称为免疫球蛋白限制性。 CD19，CD22，sIg , kappa或lambda 限制性确定为B细胞淋巴瘤后，临床还可以根据表型区分淋巴瘤的类型。 依据CD5和CD10区分B淋巴瘤/白血病4种常见类型：CD5+CD10-见于慢性淋巴细胞白血病/小细胞淋巴瘤（CLL/SLL）（同时CD23+）和套式淋巴瘤（Cyclin D1+,CD23-/+）;边缘带淋巴瘤（CD23-） CD5-CD10+ 和CD5+CD10-常见于滤泡性淋巴瘤（bcl-2+,），伯基特淋巴瘤（CD43+）； CD5-CD10-常见于毛细胞白血病(CD25+, CD103+,CD11c+,CD123+)。 弥漫性大B细胞淋巴瘤表型多变，在4种类型均可见到，为多形性大细胞，但没有其他淋巴瘤的特殊表型。 慢性淋巴细胞白血病/淋巴瘤表型设计IgG1 FITC /IgG1 PE /CD45 P