结核病基础研究进展课件.ppt

背景 近年来，由于HIV感染蔓延、糖尿病等发病率增加、人口从高发病区向高度工业化的区域迁移，使得结核病的患病人数逐年增加，导致结核病成为了具有全球性的危险和紧迫的疾病。 中国是全球22个结核病高负担的国家之一，已有三分之一人口感染了结核菌，受感染人数4.5亿，其中约10%的可能发病。近年来，国内外均已意识到对潜伏感染者进行有效的预防是有效控制结核病蔓延的重要措施之一。 目前，对于结核病的诊断，主要是依靠患者的症状、结核病接触史、影像学检查、PPD皮试试验(tuberculin skin test,TST,结核菌素皮肤试验)及痰结核菌培养。 PPD皮试试验特异性较差，而痰结核菌培养虽为诊断结核病的金标准，但较为费时且阳性率较低。 新的分子生物学检测技术如PCR、DNA指纹图谱、DNA探针技术对于菌种鉴定及流行病学研究起到了较好的作用，但费用较高，建立体系复杂，尚未普及，且对于临床结核病的诊断仍然存在假阳性和假阴性等缺点，有一定的局限性。 为了控制结核病的流行，最大限度的减少这一疾病给患者带来的伤害，减少医疗资源的耗费以及给国家社会带来的沉重的经济负担，寻找一种方法能够早期、准确地确定是否患有活动性肺结核、肺外结核以及潜伏感染，具有绝对的必要。 多年以来，医学界一直沿用PPD皮试作为判断结核杆菌感染的依据。但是由于多数国家实行BCG的接种，使得无法根据PPD皮试的阳性结果判断结核杆菌感染与否，从而影响对于结核病的早期诊断。 PPD皮试 PPD皮试是已经广泛应用了百余年的应用PPD作为抗原检测细胞免疫功能来诊断结核的一种经济、简便的方法。它可以用于流行病学大规模的筛查和普查，但存在着明显的缺陷。 PPD皮试是通过应用PPD作为抗原皮下注射，使得已致敏的淋巴细胞受到刺激活化后产生多种细胞因子，而使注射局部组织产生红肿硬结等，通过测量硬结的直径来判断是否感染结核杆菌。 PPD( purified protein derivatives)是存在于结核分枝杆菌、BCG、多种环境分枝杆菌中的200多种蛋白的混合物，成份十分复杂,存在交叉反应，因此其特异性较低。 由于全球大多数国家都进行BCG预防接种，且BCG的效应可以维持长达15年之久，所以曾经接种过BCG、感染结核分枝杆菌或暴露于环境分枝杆菌的人如施行PPD皮试实验均可能得到阳性结果。 因此，我们无法根据PPD皮试实验阳性结果区分结核杆菌感染、环境分枝杆菌感染和BCG接种。如果患者合并有免疫缺陷性疾病或处于免疫抑制状态，则PPD皮试试验的敏感性将会降低。同时，由于PPD皮试要求受检者皮下注射PPD48~72小时后再次进行测量，就为受检者带来了不便，且检测结果易受医务人员主观因素的影响，缺乏准确性。 1998年完成了结核分枝杆菌标准株H37Rv的基因组测序 RD区域(Region of Deletions,缺失区) 1998年以来，结核分枝杆菌H37Rv、BCG等分枝杆菌的基因组全序列测序工作相继完成，在DNA水平上，几乎99.5%以上的菌株的序列都是相同的。比较H37Rv和BCG的全基因组，发现H37Rv具有所有BCG菌株和大多数环境分枝杆菌所不存在的区域，人们将其定义成为缺失区域RD(包括RD1~RD16)其中RD1包括9个开放读码框(RV3871~RV3879c),现在研究较为集中的是由RD1区基因编码的ESAT-6和CFP-10两种小分子量分泌蛋白。 ESAT-6和CFP-10 ESAT-6(early secretary antigen target-6,即早期分泌抗原靶6）,SDS结果显示其相对分子量为6KD。ESAT-6是RD1区编码的重要的分泌蛋白之一，由RD1-rv3875编码，全长288个碱基对，编码95个氨基酸。 CFP-10（culture filtrate protein,即培养滤液蛋白），SDS结果显示其相对分子量为10~11KD，由位于RD1的cfp-10(lhp)基因（rv3874）编码,位于esat-6基因的上游，全长303个碱基对，编码100个氨基酸。 esat-6和cfp-10基因仅存在于致病性分枝杆菌中，所有BCG和大多数环境分枝杆菌基因组中均不含有此基因，即不表达ESAT-6和CFP-10蛋白。 esat-6 和 cfp-10基因位于一个操纵子样结构中彼此相邻。两者约有40%的同源性，具有相同的免疫学特性。对M.bovis进行基因双敲除可导致致病原的毒力下降，这表明这两个分子在免疫发病机制和毒力上可发挥重要作用。 γ-干扰素释放试验 主要包括全血ELISA(QuantiFERON-TB GOLD Assay,即QFT-G）和酶联免疫斑点法(ELISPOT或T SPOT-TB Assay)。 以上两种试