维生素b2的发酵课件.ppt

维生素B2与发酵 第六组 维生素B2的概述 一、结构与性质 维生素B2又叫核黄素(riboflavin)。 是核醇与6.7一二甲基异咯嗪的缩合物。 核黄素味苦，在240℃时变暗色，熔 点为275℃～282℃，并在此温度下引起 破坏。 性质 核黄素为橙黄色结晶化合物，溶于水，但溶解度很低，水溶液呈现黄绿色荧光 核黄素对热安定，120℃加热6小时，仅有少量分解，在碱性溶液中较易破坏，在光照及紫外线照射下，可以引起不可逆分解 结构 核黄素的异咯嗪上第1位及第10位N原子与活泼的双键相连，能接受氢而被还原成无色产物，还原后很容易再脱氢，因此具有可逆的氧化还原特性 化学结构式 二、维生素B2的作用 与组织的呼吸过程有关 参与碳水化物的中间代谢 与激素有关 促进色氨酸转化为烟酸，VB6转变为磷酸吡哆醛 维持体内还原型谷胱甘肽的浓度，参与体内的抗氧化防御系统 参与药物代谢 提高机体对环境的适应能力 三、维生素B2的发酵原理 目前核黄素的工业化生产主要有微生物发酵法和化学半合成法两种, 其中微生物发酵法以生产工艺简单、原料廉价、环境友好以及资源可再生等优点而倍受世界核黄素生产商的青睐。 (一)化学合成法制备维生素B2 将D-核糖与3，4-二甲基苯胺缩合，在氢化还原得一仲胺此仲胺与苯氯化重氮化物反应，生成一种偶氮染料化合物——3，4二甲基-6-苯偶氮-D –核糖胺最后与巴比妥酸在乙酸存在下缩合即可得到维生素B2。此维生素B2的生产工艺生产B2的产率可达95.3%，纯度达96.8%。其中合成所用的D-核糖目前是以D-葡萄糖为原料，经芽孢杆菌属细菌发酵而成的，它代替了原先用D-葡萄糖经4步反应合成D-核糖的方法。因为后者需要用到钠汞齐，从而带来了很严重的环境污染问题。化学法合成维生素B2可以利用传统的分批反应的设备，但在纯化精制阶段，偶氮燃料中间物和维生素B2均会生成细小晶体，给有效地过滤和洗涤带来了较大的困难。同时由于这2种化合物的颜色都比较深，也使工厂的车间管理较困难。 （二）微生物法合成维生素B2 维生素B2的微生物发酵生产采用三级发酵法。将在25℃培养成熟的维生素B2产生菌的斜面孢子用无菌水制成孢子悬浮液，接种于种子培养基中培养（30+℃），30~40h），最后将二级发酵液移种至三级发酵罐发酵（30+℃，160h），得到维生素B2发酵液。工业上使用的维生素B2的产生菌主要有阿氏假囊酵母（Eremotecium ashbyii）和棉病囊菌（Ashbya gossypii）2种菌。经过菌种改良后，维生素B2生产的最高水平可达到10000U/ml。产品质量好，成本低。 生产菌种 核黄素发酵的主要生产菌包括: 棉囊阿舒氏酵母A shbya gossyp ii 解朊假丝酵母 Candida famata 阿舒氏假囊酵Eremothecium ashbyii 酿酒酵 Saccharomyces sp 枯草芽孢杆菌 Bacillus subtilis 产氨棒状杆菌Corynebactiaaminogensis 然而在利用棉囊阿舒氏酵母、解朊假丝酵母和阿舒氏假囊酵母等真菌进行核黄素生产时, 存在着发酵周期过长、原料成分配比复杂、需加入不饱和脂肪酸来促进核黄素的产量等缺点。 随着基因工程技术的发展, 枯草芽孢杆菌和产氨棒状杆菌等产核黄素工程菌相继构建成功, 这些工程菌具有发酵周期短( 2~ 3天) 、原料要求简单、产量高等优点, 在核黄素的微生物发酵生产中显示了强大的生命力 四、发酵过程 第一步，菌种选取。随着分子生物学技术的发展，基因工程手段已经应用于核黄素生产菌种育种中，这样选出来的菌种具有产量高、能耗低（主要指培养菌种所需的营养物质）、产品纯度高等有点，显著提高了经济效益。 第二步，发酵方法的选取。核黄素微生物发酵法包括液体深层发酵法和固体发酵法（液体和固体主要是指培养菌种的培养基状态的不同：即培养基可以是液态的，也可以是固态的）。 这里需要指出的是，固体发酵工艺比液体发酵操作简单方便，生产规模可大可小，特别是固体发酵的设备比液体发酵降低80%成本以上，同时能大大减少能源的消耗，便于推广和应用。 第三步，核黄素的提取。即从发酵液中将核黄素提取出来。主要的提取方法有：重金属盐沉淀法，酸溶液法和碱溶液法。科学研究表明，碱溶液法提取核黄素不仅收益高，且耗能低，随着离心分离设备的不断改进，碱溶液法分离提取核黄素的优越性越来越明显。 第四步，核黄素的测定。是对发酵液中核黄素含量、质量的测定。测定的方法有：微生物法、荧光比色法、高效液相色谱技术（HPLC）,核黄素化学发光新方法等。目前核黄素化学发光新方法的精确度和灵敏度高、分析速度快，具有广泛的应用前景。